Sp-A基因SNP與河南漢族人群肺結(jié)核相關(guān)性分析.pdf

1、背景和目的:
　　 結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染而引起的慢性傳染性疾病,主要通過(guò)呼吸道飛沫傳播,侵犯肺臟引起肺結(jié)核。它是目前單一病原體引起死亡人數(shù)最多的疾病,給人類的生命和健康帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅。目前全球范圍內(nèi)已有1/3人感染了結(jié)核分枝桿菌,但其中僅有10％的感染者會(huì)發(fā)展成為活動(dòng)性結(jié)核病人。這種感染人數(shù)和發(fā)病人數(shù)的巨大差異提示該病可能與宿主的免疫力和基因易感性有關(guān)。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(Pulmonary surfactant-

2、associated proteins A,SP-A)是肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分泌的一種免疫活性蛋白,是人體呼吸系統(tǒng)天然免疫防御的重要組成部分,在肺部的免疫防御、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和過(guò)敏反應(yīng)等方面均發(fā)揮著重要作用。肺結(jié)核主要經(jīng)呼吸道傳播,肺表面的SP-A就構(gòu)成了機(jī)體抵抗結(jié)核分枝桿菌的第一道防線。本文通過(guò)病例一對(duì)照研究,對(duì)河南漢族人群中SP-A的編碼基因SFTPA1和SFTPA2序列上單核苷酸多態(tài)性(SNP)研究,從基因水平上探討SP-A的作用機(jī)制以

3、及其與肺結(jié)核發(fā)病的關(guān)系,探尋河南漢族人群肺結(jié)核的易感基因,以期為肺結(jié)核的預(yù)防和治療提出新的措施。
　　 材料和方法:
　　 病例組選取248例河南漢族初診肺結(jié)核患者,診斷均符合我國(guó)衛(wèi)生部最新的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS288-2008),其中男性162例,女性86例,年齡38.9±17.6歲;對(duì)照組為124例身體健康的肺結(jié)核隱性感染者,男82例,女性42例,年齡36.0±15.7歲;兩組中均排除HIV感染、糖尿病、使用激素類及

4、免疫抑制劑等個(gè)體。所有研究對(duì)象均于2011年8月至11月期間采自河南新鄉(xiāng)、安陽(yáng)及鄭州市結(jié)核病防治所,并經(jīng)知情同意。靜脈采血,酚一氯仿法提取其基因組DNA,應(yīng)用引物特異性PCR(SSP-PCR)、瓊脂糖凝膠電泳和基因測(cè)序的方法分析SFTP-A1基因上的aa19、aa50、aa62、aa133、aa219及SFTPA2上的aa9、aa91、aa140、aa223共9個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因型。檢測(cè)結(jié)果錄入Excel表中對(duì)病例組和對(duì)照組進(jìn)行基因型

5、和基因頻率分析,應(yīng)用SHEsis在線軟件進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn),連鎖不平衡及單體型分析;通過(guò)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行組間X。檢驗(yàn),并計(jì)算比值比(OR值)及95%可信區(qū)間(CI),評(píng)估SP-A基因與肺結(jié)核發(fā)病的相關(guān)性;應(yīng)用多因素Logistic回歸分析探討年齡、性別及遺傳易感性等多因素對(duì)肺結(jié)核發(fā)病的影響。
　　 結(jié)果:
　　 通過(guò)對(duì)248例病例組和124例對(duì)照組SFTPA1和SFTPA2基因9個(gè)SNP

6、位點(diǎn)分析結(jié)果顯示:SFTPA2基因中的aa91位點(diǎn)的G等位基因頻率和aa140的T等位基因頻率在病例組中的分布顯著高于對(duì)照組(P=0.0002和0.045),OR值分別為1.792和1.425,其他位點(diǎn)的基因和基因型頻率在病例組和對(duì)照組分布均無(wú)顯著差別(P＞0.05);
　　 對(duì)SFTPA1和SFTPA2分別進(jìn)行單體型分析,結(jié)果顯示:SFTPA1基因單體型CGAAC(尚未命名)在病例組中分布顯著低于對(duì)照組分布(P=0.025);

7、SFTPA2基因的1A6、1A10、1A9、1A2四種單體型在病例組中分布顯著高于對(duì)照組(P值分別為0.0004、0.003、0.003和0.031),而其1A13、1A5、1A12、1A11的分布則顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 對(duì)SFTPA1和SFTPA2進(jìn)行聯(lián)合分析,單體型6A11-1A8僅見(jiàn)于病例組(4.1%),分布有顯著差異(P=0.001);而CGAAC-1A0和6A4-1A12在病例組的分布顯著低于對(duì)照組(

8、P＜0.05)。
　　 對(duì)檢測(cè)結(jié)果按照性別和年齡進(jìn)行分層分析,發(fā)現(xiàn)SP-A基因與性別和年齡有一定關(guān)聯(lián):男性的6A3-1A12單體型在病例組的比例顯著高于對(duì)照組(P=0.03),6A3-1A0、6A4-1A12、CGAAC-1A0、6A5-1A、6A3-1A5則在病例組比例低于對(duì)照組(P＜0.05);而女性中,aa9-C等位基因和6A2-1A0單體型在病例組分布顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),6A3-1A0、6A2-1A12、CG

9、AAC-1A12則顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。45歲以下人群中,病例組aa140-T的基因頻率、單體型6A11-1A8、6A3-1A7、6A4-1A6顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),而6A3-1A0、6A4-1A、CGAAC-1A0則低于對(duì)照組(P＜0.05)。45歲以上病例組aa223-A等位基因頻率及CGAAC-1A12、6A4-1A12、6A3-1A13單體型分布顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。單體型6A3-1A10在病例組中

10、比例為4.2%,但未見(jiàn)于對(duì)照組,分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.044);aa91位點(diǎn)的G等位基因在分層分析的各組人群中病例組均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示,僅aa91和aa140兩變量進(jìn)入回歸方程(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、SP-A基因單核苷酸多態(tài)性與我國(guó)河南漢族人群肺結(jié)核發(fā)病相關(guān),并受到性別、年齡的影響。
　　 2、aa91-G等位基因、aa140一T等位