甲氧基歐芹酚納米制劑與氟康唑協(xié)同抗耐藥真菌作用.pdf

1、目的：本課題旨在通過研究甲氧基歐芹酚與氟康唑的相互作用，尋找能夠?qū)鼓退幇啄钪榫踩行У穆?lián)合用藥方案，為抗真菌藥物研究，尤其是水溶性差、口服生物利用度不高的抗真菌藥物研究提供新思路。
　　 方法：1.經(jīng)棋盤式微量稀釋實(shí)驗(yàn)研究甲氧基歐芹酚(Ost)與氟康唑(FLC)的協(xié)同抗耐藥白念珠菌作用，并以體外瓊脂平板擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證兩藥協(xié)同作用。2。建立甲氧基歐芹酚HPLC體外分析方法，研究藥物的溶解度、油水分配系數(shù)等基本理化性質(zhì)。3.繪制標(biāo)

2、準(zhǔn)曲線，并對(duì)回收率，精密度，專屬性進(jìn)行考察。4。以高分子聚合材料丙烯酸樹脂EudragitS100作為載體材料，以泊洛沙姆P188為乳化劑，采用乳化溶劑擴(kuò)散法制備了納米粒(Ost-S100-NP)。5.以納米粒的平均粒徑、分布、包封率及載藥量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)綜合評(píng)價(jià)法優(yōu)化處方組成及工藝；6.透射電鏡觀察了納米粒子的表面形態(tài)并測(cè)定了平均粒徑與粒度分布。7.粉末X-射線衍射法和差示熱量掃描法對(duì)Ost-S100-NP進(jìn)行鑒別；低溫超速離心

3、法分離納米粒，高效液相色譜法測(cè)定包封率。8.恒溫振蕩法對(duì)納米粒的在不同pH介質(zhì)中的體外釋藥進(jìn)行研究；用動(dòng)態(tài)透析法研究其體外釋藥特性。9.以O(shè)st溶液為參比制劑，將納米粒對(duì)大鼠灌胃，研究其口服藥代動(dòng)力學(xué)。10.通過系統(tǒng)性真菌感染小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證Ost與氟康唑合用的抗真菌作用。
　　 結(jié)果：1.棋盤式微量稀釋實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單用氟康唑耐藥的菌株，合用甲氧基歐芹酚后，菌株對(duì)氟康唑的敏感性增強(qiáng)，合用后氟康唑的平均MIC80為2.82μg/

4、ml，同時(shí)甲氧基歐芹酚的平均MIC80降到4.73μg/ml，平均協(xié)同指數(shù)為0.135。體外瓊脂平板擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了以上結(jié)果，與任何一種藥物的單用效果相比，合用藥片的抑菌圈明顯擴(kuò)大，邊界清晰，抑菌圈內(nèi)沒有菌落生長(zhǎng)。而在無法抑制耐藥菌生長(zhǎng)的64μg/ml氟康唑的瓊脂平板上，甲氧基歐芹酚藥片周圍顯現(xiàn)出明顯的抑菌圈。2.確定甲氧基歐芹酚的體外HPLC分析條件為：ODSC18(4.6mm×250mm，5um)色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水(60:40)

5、；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為20μL。3.以峰面積(y)對(duì)濃度(x)作回歸，得到線性方程為：y=68988x-11763，R=0.9997。線性范圍：1.027-90.080μg/mL，甲氧基歐芹酚量與色譜峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。甲氧基歐芹酚峰的保留時(shí)間為7.6min左右，而空白納米粒在相應(yīng)位置無吸收峰出現(xiàn)，即載體材料和輔料不影響藥物的測(cè)定。4.以納米粒的平均粒徑、分布、包封率及載藥量為

6、指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方組成為P188125mg；蒸餾水125mL；Ost50mg；EudragitS100200mg；油水比2:5；溫度30℃；攪拌速度400r/min。5.所得Ost-S100-NP平均粒徑為55.4±2.1nm；PDI(0.065±0。005)；包封率為(98.99±0.1)％；載藥量(23.85±0.2)％；回收率為(98.5±0.1)％；綜合評(píng)分0.362。6.以最佳工藝處方所制備的甲氧基歐芹酚納米粒粒徑分布

7、為單峰分布，粒徑分布范圍為25-120nm，平均粒徑為55.47nm。Ost-S100-NP在電鏡下為均勻規(guī)則的圓球形，沒有粘連的現(xiàn)象。7.XRD分析表明三者之間發(fā)生了較強(qiáng)的相互作用，結(jié)晶形態(tài)發(fā)生改變，形成了納米粒。DSC分析提示生成了新的物相，納米粒形成，與XRD分析結(jié)果一致。8.與Ost對(duì)照，Ost-S100-NP的體外釋藥具有顯著的pH依賴性。隨著pH值的升高，藥物釋放百分率逐漸增大，當(dāng)pH≥6.0時(shí)，釋藥量均>80％。Ost-S

8、100-NP在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中能夠完全釋放。9.相比溶液，Ost-S100-NP能明顯提高Ost的血藥濃度，延長(zhǎng)達(dá)峰時(shí)間，降低藥物的血漿清除率，減緩藥物的消除，提高其生物利用度，相對(duì)生物利用度為168％。10.氟康唑合用甲氧基歐芹酚后能顯著提高系統(tǒng)性真菌感染小鼠的存活率，療效顯著增強(qiáng)，二者呈現(xiàn)明顯的協(xié)同作用。與Ost溶液相比，相同劑量的Ost-S100-NP合用氟康唑能更好的觀察到兩藥的協(xié)同作用，效果更為明顯。