尿酸和血管內(nèi)皮功能障礙相關(guān)研究.pdf

1、尿酸是嘌呤代謝產(chǎn)物，人類基因突變而使人的血尿酸水平較其它哺乳動(dòng)物高。臨床觀察到高尿酸血癥與血管性、代謝性疾病有密切聯(lián)系。流行病研究發(fā)現(xiàn)，人群中隨血尿酸水平升高，心血管疾病和代謝綜合征等的發(fā)病率隨之升高。關(guān)于尿酸影響血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的基礎(chǔ)研究結(jié)果分歧較大，有研究證實(shí)尿酸是抗氧化物質(zhì)，可以清除自由基，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用；另一些研究發(fā)現(xiàn)高尿酸通過(guò)抑制一氧化氮(NO)生成，促進(jìn)活性氧簇(ROS)產(chǎn)生，引起炎癥反應(yīng)而損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞；還有觀點(diǎn)

2、提出不同濃度血尿酸作用可能不同。臨床上高尿酸血癥常常伴隨高脂血癥；研究表明氧化低密度脂蛋白等脂質(zhì)成分是明確的致血管損傷物質(zhì)，但目前缺乏血脂和尿酸共同作用對(duì)內(nèi)皮功能影響的研究。通過(guò)研究尿酸和氧化低密度脂蛋白對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，期望有助于揭示尿酸在病理狀態(tài)下的作用機(jī)制。
　　 目的：
　　 1)通過(guò)不同濃度尿酸(UA)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激體外培養(yǎng)的人體臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，測(cè)定氧化產(chǎn)物ROS

3、的產(chǎn)生，和內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶(eNOS)、血管活性調(diào)節(jié)分子內(nèi)皮素-1(ET-1)mRNA的表達(dá)情況，觀察兩者共同作用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響；2)利用AffymetrixHG-U133_Plus_2芯片研究體外尿酸刺激72小時(shí)，HUVEC基因表達(dá)譜變化，觀察尿酸刺激對(duì)HUVEC功能的影響；3)通過(guò)橫斷面研究，了解北京協(xié)和醫(yī)院體檢職工群體中高尿酸血癥與血脂異常的相關(guān)性。
　　 方法
　　 1)經(jīng)MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后確定

4、尿酸和氧化低密度脂蛋白的作用濃度。尿酸(0、5、20mg/dL)和氧化低密度脂蛋白(0，25，50μg/mL)，共同刺激體外培養(yǎng)HUVEC24小時(shí)后，DCFHDA熒光染色共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞ROS產(chǎn)生；RT-PCR和Real-TimePCR檢測(cè)eNOS和ET-1mRNA的表達(dá)水平。2)利用AffymetrixHG-U133_Plus_2芯片和GCOS軟件分析體外尿酸刺激72小時(shí)后HUVEC基因表達(dá)譜變化，篩選表達(dá)量變化超過(guò)2倍的基因(P

5、<0.05)，進(jìn)行聚類分析和功能復(fù)習(xí)。3)多因素分析法分析2008年協(xié)和醫(yī)院體檢職工查體資料和生化檢測(cè)指標(biāo)，探討高尿酸血癥和血脂異常的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1)不同濃度尿酸(0、5、20mg/dL)和氧化低密度脂蛋白(0、25、50μg/mL)共同刺激HUVEC24小時(shí)，經(jīng)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HUVEC胞漿中DCFDA探針標(biāo)記的ROS生成量隨UA和oxLDL濃度增加而增加(P<0.001)，高濃度尿酸有減少o

6、xLDL產(chǎn)生ROS的趨勢(shì)(P=0.093)。Real-TimePCR發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)24小時(shí)，尿酸單獨(dú)作用時(shí)增加eNOS表達(dá)(P<0.05)，對(duì)ET-1表達(dá)無(wú)顯著性影響；oxLDL單獨(dú)作用時(shí)減低eNOS表達(dá)(P<0.01)，增加ET-1表達(dá)(P<0.01)；UA和oxLDL存在交互作用(P<0.05)，表現(xiàn)為高濃度尿酸(UA=20mg/dL)時(shí)，oxLDL減低eNOS表達(dá)的趨勢(shì)線(P=0.052)斜率增加，增加ET-1表達(dá)的趨勢(shì)線(P<0.05

7、)斜率也增加；生理濃度尿酸(UA=5mg/dL)時(shí)oxLDL對(duì)eNOS、ET-1表達(dá)影響不顯著。
　　 2)基因芯片結(jié)果分析顯示不同濃度尿酸(5，10，20mg/dL)刺激72小時(shí)，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞全基因組表達(dá)的影響趨勢(shì)一致，有274個(gè)基因探針信號(hào)值表達(dá)變化超過(guò)兩倍(P<0.05)，其中下調(diào)信號(hào)133個(gè)，上調(diào)信號(hào)141個(gè)?；蚬δ芊诸惣杏诩?xì)胞連接黏附、多細(xì)胞有機(jī)體發(fā)育、結(jié)構(gòu)發(fā)育、分泌蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)和信號(hào)途徑?？赡芘c心血管病相關(guān)的基

8、因有整聯(lián)蛋白(CD51)、基質(zhì)半乳糖苷酶-a蛋白(matrixglaprotein4)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin，TM)、CD36、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin1)、胎盤生長(zhǎng)因子(placentalgrowthfactor，PGF)、內(nèi)皮脂肪酶(endotheliallipase，LIPG)、corin、硫酸酯酶、白介素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子[interleukinsignaltransducer(gp130)]、

9、白介素受體超家族亞基、腫瘤壞死因子超家族配體4[tumornecrosisfactor(ligand)，superfamily，member4]、趨化因子配體chemokine(c-x-cmotif)ligand、Bcl-2相關(guān)轉(zhuǎn)錄抑制因子。值得注意的是與膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因ABCAl[ATP-bindingcassette，sub-familyA(ABCl)，member1]在不同尿酸水平表達(dá)調(diào)控趨勢(shì)不同。
　　 3)協(xié)和醫(yī)院

10、體檢職工查體和血液生化檢查資料分析顯示，血尿酸異常率為14.3％，血脂指標(biāo)任意一項(xiàng)有異常的比例為68.6％；高尿酸血癥和LDL-C異常、HDL-C異常、TC異常和TG異常相關(guān)OR1.85-3.09(P<0.01)；年齡性別分層后，高尿酸與TG異常仍普遍密切相關(guān)，高尿酸與LDL-C、TC異常在50歲以下男女中密切相關(guān)，與50歲以下男性和50歲以上女性HDL-C異常密切相關(guān)；BMI分層后，高尿酸與TC、TG、LDL-C異常密切相關(guān)(P<0.

11、01)；校正年齡、性別、BMI、血糖、血壓、腎功能后，高尿酸血癥和血脂異常仍有相關(guān)性O(shè)R1.39-2.15(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1)初步研究發(fā)現(xiàn)，體外刺激24小時(shí)，尿酸和氧化低密度脂蛋白增加HUVECROS生成，統(tǒng)計(jì)學(xué)未發(fā)現(xiàn)顯著的交互作用。Real-TimePCR結(jié)果顯示高濃度尿酸(20mg/dL)單獨(dú)作用時(shí)增加eNOS表達(dá)，但使氧化低密度脂蛋白降低eNOS表達(dá)和升高ET-1表達(dá)的作用更明顯。提示高濃度