肝癌細(xì)胞β1整合素再分布變化對(duì)其遷移取向影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 肝癌細(xì)胞 β1 整合素再分布變化對(duì)其遷移取向影響的實(shí)驗(yàn)研究 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 學(xué)生姓名：劉艷鳴 指導(dǎo)教師：王紅兵 副教授 專 業(yè)：細(xì)胞生物學(xué) 學(xué)科門類：理學(xué) 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 OO 八年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 肝癌細(xì)胞在體外二維培養(yǎng)中的遷移粘附特性表現(xiàn)為粘附穩(wěn)定性下降，細(xì)胞頻發(fā)形變，

2、遷移速率增快和遷移方向頻繁改變。整合素是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和運(yùn)動(dòng)行為的重要分子, 腫瘤細(xì)胞的這些運(yùn)動(dòng)粘附特性與其整合素分布變化及分布調(diào)節(jié)存在一定的相關(guān)性。 本實(shí)驗(yàn)研究在誘發(fā)肝癌細(xì)胞 Hep G2 整合素再分布變化的基礎(chǔ)上，總結(jié)整合素再分布變化趨勢(shì)和特征，并結(jié)合肝癌細(xì)胞粘附運(yùn)動(dòng)變化規(guī)律，探索整合素再分布變化對(duì)肝癌細(xì)胞粘附運(yùn)動(dòng)行為的影響。 本研究通過機(jī)械拉伸和胞外基質(zhì)裱襯誘發(fā)整合素再分布變化，運(yùn)用間接免疫熒光技術(shù)，激光共聚焦

3、顯微鏡對(duì)肝癌細(xì)胞整合素表達(dá)水平和位置改變進(jìn)行檢測(cè)和定量分析，同時(shí)運(yùn)用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)細(xì)胞骨架(F-actin)進(jìn)行分析，運(yùn)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和圖像處理技術(shù)對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)變形能力進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測(cè)和定量分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1) 分析人肝癌Hep G2細(xì)胞整合素分布特征發(fā)現(xiàn)，從細(xì)胞錨著的基底層至下而上其整合素分布量逐漸減少。比較不同形狀細(xì)胞整合素表達(dá)和分布趨勢(shì),發(fā)現(xiàn)群居細(xì)胞（群體中單個(gè)細(xì)胞）β1整合素表達(dá)最高,鋪展細(xì)胞次之,圓細(xì)胞最弱，但圓

4、細(xì)胞游離面整合素反較基底面多。 不同形態(tài)細(xì)胞β1整合素分布峰值比較： 圓形細(xì)胞為距基底6μm平面,鋪展細(xì)胞為基底至4μm平面, 群居細(xì)胞為基底面；在機(jī)械拉伸(10%拉伸, 30r/min)5h后, 不同形態(tài)細(xì)胞β1整合素表達(dá)均升高，分布發(fā)生變化即峰值均下移至基底面， β1整合素向基底層轉(zhuǎn)移有利于形成局部粘附連接。在去除機(jī)械拉伸刺激即卸載1h后, β1整合素分布傾向發(fā)生彌散分布變化，游離面整合素普遍增多，與靜態(tài)對(duì)照和加載組相比， β1整合

5、素基底面與游離面分布量落差減小， 且圓形細(xì)胞整合素分布峰值出現(xiàn)上移至距基底6μm平面，并明顯高于基底面。 2）裱襯纖連蛋白(FN)后檢測(cè)人肝癌Hep G2細(xì)胞表面β1整合素表達(dá)發(fā)現(xiàn),β1整合素表達(dá)顯著增加，不同形態(tài)細(xì)胞整合素分布呈現(xiàn)相同特征和趨勢(shì),即基底面明顯多于游離面分布量， 在基底面可見散在分布的點(diǎn)狀強(qiáng)熒光區(qū)。 預(yù)示β1整合素與特異性配體的結(jié)合使其表達(dá)分布發(fā)生重組,形成粘著斑。不同狀態(tài)（靜態(tài)對(duì)照與機(jī)械刺激、FN裱襯）融合區(qū)群體細(xì)胞總