CNTF在青光眼大鼠視網膜中的表達變化及對純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞的影響.pdf

1、目的:（1）建立青光眼動物模型眼為進一步研究奠定基礎；（2）探討青光眼大鼠視網膜中睫狀神經營養(yǎng)因子表達的變化；（3）研究睫狀神經營養(yǎng)因子對純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞活性和突起再生的影響。 方法:（1）采用電凝大鼠鞏膜表面靜脈及角膜周圍血管的方法建立慢性高眼壓性青光眼動物模型；（2）在模型建立后1 天、7 天和28 天獲取視網膜，采用免疫組化的方法探測睫狀神經營養(yǎng)因子在視網膜組織中的表達的變化；（3）取新生1～3天大鼠視網膜，胰

2、酶消化并用細胞篩純化，接種于多聚鳥氨酸包被的96孔培養(yǎng)板，隨機分為5組，24小時細胞貼壁后，換液時分別加入不含睫狀神經營養(yǎng)因子及含10ng?ml-1、20ng?ml-1、30ng?ml-1、40ng?ml-1睫狀神經營養(yǎng)因子的5種培養(yǎng)液，于加入含睫狀神經營養(yǎng)因子培養(yǎng)液后第1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天以四甲基偶氮唑鹽比色法測定不同濃度的睫狀神經營養(yǎng)因子對純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞總體活性的影響，計數在400倍相差

3、顯微鏡和熒光顯微鏡下神經節(jié)細胞突起數。 結果:（1）在正常大鼠視網膜中，睫狀神經營養(yǎng)因子主要表達于視網膜神經節(jié)細胞層，在青光眼大鼠視網膜中，睫狀神經營養(yǎng)因子表達增加，不僅表達于視網膜的神經節(jié)細胞層，內核層、外核層中均出現表達；（2）加入含睫狀神經營養(yǎng)因子培養(yǎng)液后第1～7天，加入高濃度的睫狀神經營養(yǎng)因子組大鼠視網膜神經節(jié)細胞總體活性較高，至第7天，各組總體活性均有顯著性差異（p<0.05），第13～15天，40 ng?ml-1的

4、睫狀神經營養(yǎng)因子對比20 ng?ml-1、30 ng?ml-1的睫狀神經營養(yǎng)因子提高純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞總體活性的作用有下降趨勢(p<0.05)。加入CNTF后3～5d，40 ng?ml-1組突起率顯著高于對照組（P<0.05）。7～15d，20 ng?ml-1、30 ng?ml-1、40 ng?ml-1組突起率顯著高于對照組（P<0.05），30 ng?ml-1、40 ng?ml-1組突起率顯著高于10 ng?ml-1、20

5、ng?ml-1組（P<0.05）。 結論:（1）用前述方法成功建立了慢性青光眼動物模型；（2）青光眼動物模型建立后7～28天，視網膜中睫狀神經營養(yǎng)因子除在神經節(jié)細胞層表達外，內核層、外核層也出現表達；（3）睫狀神經營養(yǎng)因子有明顯的提高純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞總體活性的作用，1～7天內睫狀神經營養(yǎng)因子的濃度和純化培養(yǎng)大鼠視網膜神經節(jié)細胞總體活性有量效關系，13～15天40 ng?ml-1的睫狀神經營養(yǎng)因子提高純化培養(yǎng)大鼠視網