CNTF-LIF在大鼠晶狀體損傷促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞再生中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、眼外傷(ocular trauma)是視力損害的主要原因,尤其是單眼失明的首要原因,其中常見的有外傷性視神經(jīng)病變(traumatic optic neuropathy,TON),導(dǎo)致難以治愈的繼發(fā)性或原發(fā)性視力喪失,致傷原因可以是頭部或眶部受傷,間接引起視神經(jīng)受傷,也可以是直接的完全性橫斷傷。視神經(jīng)損傷后經(jīng)過一系列較為復(fù)雜的病理過程,諸多因素影響到受損視神經(jīng)的修復(fù)再生,然而受損視神經(jīng)的修復(fù)再生是最終治療TON的唯一途徑。因此,尋找有效的

2、手段促進(jìn)視神經(jīng)再生及其機(jī)制成為神經(jīng)生物學(xué)科的研究熱點(diǎn)。
　　 在大鼠視神經(jīng)損傷后促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞再生的實(shí)驗(yàn)研究中,損傷晶狀體并形成白內(nèi)障在上述過程所起的作用逐漸被認(rèn)可,其機(jī)制也被國內(nèi)外眾多學(xué)者關(guān)注。睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)及白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)做為白細(xì)胞介素6家族成員,玻璃體內(nèi)注入外源性CNTF能促進(jìn)視網(wǎng)膜神

3、經(jīng)節(jié)細(xì)胞的再生,然而內(nèi)源性CNTF／LIF是否參與晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)再生這一過程一直鮮見報(bào)道,在此我們通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行了相關(guān)探索。
　　 目的：觀察晶狀體的損傷能否促進(jìn)視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞再生,檢測GAP-43、CNTF及LIF在視網(wǎng)膜的表達(dá)情況,初步探討其在晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)再生過程中的作用機(jī)制。
　　 方法：選取56只成年健康無眼疾的Wistar大鼠,雌雄不限,按照隨機(jī)化原則分為3組:正常組(8只大鼠

4、)、單純損傷組(24只大鼠)和聯(lián)合損傷組(24只大鼠)。正常對照組在飼養(yǎng)7天后摘除眼球；單純損傷組、聯(lián)合損傷組于術(shù)后7天、14天及21天摘除術(shù)眼,每組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別摘除8只眼球,常規(guī)HE染色觀察視網(wǎng)膜組織病理學(xué)變化；利用免疫組化及Biosens Digital Imaging System V1.6系統(tǒng)檢測生長相關(guān)蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)、CNTF及LIF在視網(wǎng)膜的表達(dá)并進(jìn)行

5、量化,統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠視網(wǎng)膜HE染色:正常組視網(wǎng)膜各層排列規(guī)律,層次清晰；單純損傷組,視網(wǎng)膜厚度下降明顯,神經(jīng)纖維層近消失,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失較多、極其稀疏,可見大量空泡及炎性細(xì)胞,內(nèi)叢狀層及外叢狀層疏松變薄,內(nèi)顆粒層及外顆粒層細(xì)胞數(shù)量減少,排列不均勻；聯(lián)合損傷組,視網(wǎng)膜的厚度輕度下降且神經(jīng)纖維層依然存在,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少,但較單純視神經(jīng)損傷組數(shù)量增加,可見少量空泡,內(nèi)顆粒層及外

6、顆粒層稍稀疏,內(nèi)叢狀層及外叢狀層略變薄。
　　 2.大鼠視網(wǎng)膜GAP-43免疫組化染色:正常組視網(wǎng)膜幾乎沒有表達(dá),積分光密度值為59.49±0.99／鼠。單純損傷組術(shù)后7天少量表達(dá),積分光密度值為80.98±1.62／鼠；14天及21天積分光密度值分別為60.44±1.29／鼠、59.34±1.32／鼠。14天及21天積分光密度值均較7天組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),術(shù)后14天及21天時(shí)積分光密度值與正常組差異無統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(14天組與正常組相比P=0.118；21天組與正常組相比P=0.784)。聯(lián)合損傷組術(shù)后7天見GAP-43陽性細(xì)胞,積分光密度為121.70±1.99／鼠；術(shù)后14天及21天積分光密度值分別為122.94±1.19／鼠、122.20±1.09／鼠；各時(shí)間點(diǎn)的積分光密度值較正常對照組均增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),但各時(shí)間點(diǎn)積分光密度值相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.26)。
　　 7天時(shí),各處理組間積分光密

8、度值的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；14天及21天時(shí),除正常組與單純損傷組外,其他各比較組之間積分光密度值的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；
　　 3.大鼠視網(wǎng)膜CNTF／LIF免疫組化染色:正常組有少量CNTF及LIF表達(dá),其積分光密度值分別為70.25±1.14／鼠、68.55±0.68／鼠。單純損傷組7天CNTF積分光密度值為84.63±0.87／鼠,高于正常組且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；14天CNT

9、F陽性區(qū)積分光密度值為61.33±0.66／鼠,低于7天組及正常組且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。聯(lián)合損傷組術(shù)后7天、14天CNTF的積分光密度值分別為121.48±0.87／鼠、121.30±0.71／鼠,較正常對照組均增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),2個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.667)。7天及14天時(shí),三個(gè)處理組的積分光密度值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),且各處理組間積分光密度值的差別均有統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 術(shù)后7天時(shí),單純損傷組及聯(lián)合損傷組LIF的表達(dá)積分光密度值分別為81.27±0.69／鼠、120.21±0.61／鼠,較正常組均有增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；LIF的表達(dá)在聯(lián)合損傷組高于單純損傷組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 結(jié)論：
　　 1.視神經(jīng)完全橫斷后,損傷晶狀體使視網(wǎng)膜GAP-43穩(wěn)定持續(xù)高表達(dá),促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突再生。
　　 2.