重組大腸桿菌高密度發(fā)酵研究.pdf

1、本文對重組大腸桿菌(pRIL+pET28-pfa)高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。確定出最佳培養(yǎng)基組成為(g/L)：葡萄糖10.0，酵母膏11.5，蛋白胨(魚粉)19.5，(NH4)2SO44.0，K2HPO4·3H2O18.0，KH2PO43.0，MgSO41.2，微量元素母液1.OmL。對重組大腸桿菌誘導(dǎo)條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳的誘導(dǎo)時機(jī)為菌體對數(shù)生長中后期(A600達(dá)到7.0左右)，乳糖濃度為1g/L，誘導(dǎo)時間為8h。

2、對搖瓶中培養(yǎng)條件的優(yōu)化采用單因子實驗法，研究了溫度、培養(yǎng)基初始pH、裝液量、種齡和接種量等對工程菌生長和產(chǎn)酶的影響，確定了最佳培養(yǎng)條件為：溫度37℃、培養(yǎng)基裝液量35mL/250mL、培養(yǎng)基初始pH7.1、種子培養(yǎng)時間8h、接種量1％。采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，發(fā)酵18h，菌體密度A600達(dá)到12.8，菌體干重為4.7g(DCW)/L，酶活力達(dá)到210U/mL發(fā)酵液，分別為初始條件下的3.1和14.9倍。 采用分批補(bǔ)料的方法

3、發(fā)酵重組大腸桿菌(pRIL+pET28-pfa)，對發(fā)酵工藝及高密度發(fā)酵的方法進(jìn)行了探索。在發(fā)酵罐實驗中，比較幾種不同的補(bǔ)料策略：恒速流加法、pH-Stat流加法、指數(shù)流加法和變指數(shù)-恒pH值混合流加法。結(jié)果表明：變指數(shù)-恒pH值混合流加法更能有效地避免發(fā)酵過程中低分子有機(jī)酸的積累，菌體濃度A600最終達(dá)到165，菌體干重為62.7g(DCW)/L，酶活力達(dá)到700U/mL。 探索了大腸桿菌主要厭氧代謝途徑可能對高密度重組大腸桿