細(xì)胞凋亡在自發(fā)性高血壓大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的角色研究.pdf

1、目的：研究自發(fā)性高血壓大鼠視網(wǎng)膜病變毛細(xì)血管細(xì)胞凋亡的發(fā)生，探討細(xì)胞凋亡與高血壓視網(wǎng)膜微血管病變之間的關(guān)系。 方法：10只雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和10只雄性正常血壓大鼠(WKY)作為動(dòng)物模型，自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，生活在晝夜節(jié)律為12小時(shí)、保持一定溫度和濕度的空間。在各組大鼠到期后(13周和18周)，臨處死前2天稱重，以0.5％戊巴比妥腹腔麻醉，經(jīng)尾套法測(cè)量血壓，并于暗室散瞳進(jìn)行眼底檢查并攝片，然后處死大鼠取眼球做視網(wǎng)

2、膜消化鋪片(1)HE染色及圖像分析，動(dòng)態(tài)觀測(cè)視網(wǎng)膜微血管形態(tài)的改變及測(cè)定視網(wǎng)膜毛細(xì)血管面積占每個(gè)高倍視野(HPF)面積的比值。(2)采用核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口翻譯法(TUNEL法)檢測(cè)視網(wǎng)膜微血管細(xì)胞凋亡變化，計(jì)數(shù)每個(gè)高倍視野(HPF)的凋亡細(xì)胞。(3)電鏡下觀察視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果： (1)SHR組收縮壓在不同周齡均明顯高于對(duì)照WKY組(P＜0.01)，其中13局齡為(148.8±9.9)mmH

3、gvs(75.9±3.2)mmHg(P＜0.01)，18周齡為(154.4±17.9)mmHgvs(75.7±5.9)mmHg(P＜0.01)。眼底檢查采用Keith-Wagener眼底分級(jí)法分級(jí)，SHR13w和18w組眼底病變相當(dāng)于高血壓眼底第Ⅰ、Ⅱ級(jí)的改變。 (2)血管鋪片HE染色顯示SHR組部分毛細(xì)血管閉塞，毛細(xì)血管細(xì)胞丟失，出現(xiàn)無(wú)細(xì)胞毛細(xì)血管，各組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管出現(xiàn)毛細(xì)血管稀少，13w及18wSHR視網(wǎng)膜毛細(xì)血管密度較同

4、期WKY組有明顯下降(P＜0.01)。 (3)TUNEL法標(biāo)記均顯示SHR各周齡出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，且其凋亡水平隨周齡增加并逐漸升高。WKY各組未見(jiàn)陽(yáng)性猾亡細(xì)胞，與SHR13W組比較，SHR18w組凋亡細(xì)胞的數(shù)量增加明顯(P＜0.05)。 (4)透射電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，WKY組視網(wǎng)膜微血管細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變，13周和18周SHR組視網(wǎng)膜微血管細(xì)胞出現(xiàn)凋亡和變性。 結(jié)論：在高血壓視網(wǎng)膜病變的進(jìn)程中，存在視網(wǎng)膜微血管稀少