1，5-脫水山梨醇的測定及其應用研究.pdf

1、背景與目的：近年來，越來越多的人為糖尿病所折磨，糖尿病已經(jīng)成為威脅人類健康的主要疾病之一，這引起了人們的極大關注。但是，遺憾的是，人類目前尚不能治愈這種疾病。因此，糖尿病作為一種慢性病，早預防，早診斷，早治療，對于糖尿病患者的預后來說尤其重要。為適應這種要求，我們開展了糖尿病早期診斷試劑盒的研制與開發(fā)。而1,5-脫水-D-山梨醇是一種存在于人類血液中的正?；衔?，由于其代謝穩(wěn)定，在血液中波動范圍小，可及時反應血糖的短期變化，具有空腹血糖

2、、果糖胺和糖化血紅蛋白所不具有的特征，在糖尿病的診斷與治療中很有價值，值得臨床推廣和應用。 方法：由于本試劑盒的前半部分已經(jīng)完成，本研究為糖尿病早期診斷試劑盒的研制與開發(fā)的后期實驗部分，本試驗擬計劃包括五部分來完成： 一、已糖激酶底物特異性實驗研究，應用相同的己糖激酶偶聯(lián)6-磷酸葡萄糖脫氫酶試劑對3種濃度的12種糖進行催化特異性實驗； 二、葡萄糖脫氫酶底物特異性實驗研究，應用相同的葡萄糖脫氫酶試劑和固定參數(shù)對12

3、種糖類物質進行催化率實驗研究； 三、吡喃糖氧化酶底物特異性實驗研究，應用相同的吡喃糖氧化酶試劑和固定參數(shù)對12種糖類物質、甘油和乙二醇等進行催化率實驗研究； 四、葡萄糖清除實驗研究，首先用已糖激酶將樣品中內源性的葡萄糖轉化為毗喃糖氧化酶(PROD)無催化作用的6-磷酸葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶檢測樣品中葡萄糖的殘留情況； 五、1，5-脫水-D-山梨醇檢測方法的建立與臨床應用，使用已經(jīng)建立的血清1，5-脫水-D-山

4、梨醇檢測方法對86例健康人、134例糖耐量異常病人和106例非胰島素依賴型糖尿病患者進行檢測。 結果： 一、將其對葡萄糖的催化作用定為100％時，已糖激酶/葡萄糖6磷酸脫氫酶試劑對山梨糖、甘露醇無催化活性；對山梨醇幾乎無催化活性(0.01％)；對果糖，(0.59％)和木糖(0.54％)有極弱的催化活性；對半乳糖和1，5-脫水-D-山梨醇的催化活性分別為1.80％和1.24％；對乳糖無催化活性，對蔗糖和纖維二糖幾乎無催化活

5、性，對麥芽糖則有平均2.55％的催化活性。 二、將其對葡萄糖的催化作用定為100％時，葡萄糖脫氫酶對單糖中的半乳糖催化率最高可以達到17.13％，其次是木糖，可以達到8.27％，對1.5-脫水-D-山梨醇的催化作用則很弱，僅為1.51％，對果糖、山梨糖、甘露醇、山梨醇則幾乎無催化作用；葡萄糖脫氫酶對雙糖中的乳糖的催化率可以達到17.93％，對纖維二糖和麥芽糖的催化作用很低，兩者分別為2.63％和1.80％，對蔗糖則幾乎沒有催化作

6、用，僅為0.39％。 三、將其對葡萄糖的催化作用定為100％時，吡喃糖氧化酶對單糖中的山梨糖催化率最高可以達到87.51％，其次是木糖(83.17％)和1，5-脫水-D-山梨醇(82.32％)，半乳糖為40.69％，對果糖、甘梨醇、山梨醇幾乎無催化作用；吡喃糖氧化酶對雙糖中的麥芽糖催化率為3.19％，對乳糖、蔗糖、纖維二糖幾乎無催化作用；對同等濃度的非糖類物質甘油和乙二醇的催化作用也很小，但是對于高濃度的甘油和乙二醇(應用濃度在

7、2.2～3.3％)催化活性則很高。 四、本方法可將樣品中高達60mmol/L，即10.8g/L的葡萄糖完全轉化。 五、1，5-脫水-D-山梨醇水平在86例正常人(106.1±59.9)和134例糖耐量異?；颊?49.4±40.1)及106例非胰島素依賴型糖尿病患者(9.6±11.6)之間差異具有顯著性意義(P<0.001)，糖尿病患者的血清1，5-脫水-D-山梨醇水平明顯降低。 結論： 一、在建立新的檢測

8、方法前要對酶的底物催化特異性進行評價。 二、應用葡萄糖脫氫酶建立葡萄糖測定方法前應做葡萄糖脫氫酶的糖底物特異性催化實驗研究。 三、建立1，5-脫水-D-山梨醇測定方法前應做吡喃糖氧化酶對不同糖底物、甘油和乙二醇的特異性催化實驗研究。 四、由于吡喃糖氧化酶底物催化特異性不好，在測定1，5-脫水-D-山梨醇前，必須先清除樣品中的葡萄糖，以避免干擾樣本中1，5-脫水-D-山梨醇的測定。 五、1，5-脫水-D-山