低劑量尼古丁通過EGR1通路拮抗Aβ介導(dǎo)的神經(jīng)毒性.pdf

1、阿爾茲海默病是在老齡人群體中非常普遍的一種癡呆病,以記憶功能減退及認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)。而且,阿爾茲海默病患者還伴隨著語言障礙、視覺能力惡化以及運動協(xié)調(diào)功能喪失,最終導(dǎo)致死亡。阿爾茲海默病的病理特征則主要是大腦皮層和海馬區(qū)大量的淀粉樣蛋白Ap的聚集以及細(xì)胞內(nèi)高度磷酸化的Tau蛋白形成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)。據(jù)預(yù)測,到2030年全球患老年癡呆的人數(shù)將達(dá)到6000萬。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),相對于不吸煙的人群來說吸煙者罹患阿爾茲海默病的發(fā)病率會有

2、所降低。但是,吸煙人群患阿爾茲海默病機(jī)率降低這種現(xiàn)象背后的機(jī)制仍然沒能得到清楚地闡述。即刻早期生長因子(early growth responsefactor-1,EGR-1)可以促進(jìn)細(xì)胞的生長、分化,在氧化應(yīng)激、凋亡及電離輻射的環(huán)境下也發(fā)揮著重要的作用。但EGR-1在阿爾茲海默病中的作用卻不清楚。
　　 主要在神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y絀胞系中,采用Western blotting、PCR技術(shù)和其他的分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行研究。我

3、們的研究發(fā)現(xiàn),10-6M的尼古丁可以劑量依賴性和時間依賴性活化即刻早期反應(yīng)因子EGR-1基因的蛋白表達(dá),在轉(zhuǎn)錄水平,通過普通PCR及real-time PCR研究分析可知尼古丁同樣可以刺激EGR-1基因的活化。而且,進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)尼古丁介導(dǎo)的EGR-1基因的活化是通過激活MAPK/ERK信號通路的活化,當(dāng)我們用shRNA將尼古丁乙酰膽堿受體nAchRα7進(jìn)行干擾后,尼古丁介導(dǎo)的MAPK/ERK/EGR-1信號通路的活化,受到一定程度的

4、抑制,這說明尼古丁對神經(jīng)母細(xì)胞瘤的這些刺激作用是通過對尼古丁乙酰膽堿受體α7(nAchRα7)的激活。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡及測定細(xì)胞活力的MTT法發(fā)現(xiàn),10-6M Aβ25-35可顯著增加細(xì)胞的凋亡及降低了細(xì)胞的活力,而尼古丁可以降低由Aβ介導(dǎo)的神經(jīng)毒性。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的早期凋亡發(fā)現(xiàn),10-6MAβ25-35處理的細(xì)胞組凋亡數(shù)目相對于對照組來說,凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加,從6.1％增加到13.25％。進(jìn)一步通過Western blot

5、ting技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),EGR-1可以上調(diào)細(xì)胞中周期蛋白cyclinD1的表達(dá),而且細(xì)胞周期蛋白cyclinD1的蘇氨酸286位置上的磷酸化水平也隨著EGR-1的活化而增高,我們建立了EGR-1基因穩(wěn)定過表達(dá)和干擾的SH-SY5Y細(xì)胞系,同樣驗證了EGR-1基岡對細(xì)胞周期蛋白cyclinD1的正向調(diào)控作用,這可能是尼古丁降低淀粉樣蛋白Aβ25-35毒性的分子機(jī)制之一。
　　 我們的研究結(jié)果顯示,在阿爾茲海默病中,即刻早期反應(yīng)因子E