中國人群HIV-1Nef蛋白特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的研究.pdf

1、目前獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)已成為嚴(yán)重危害全人類健康的傳染病之一。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法能夠抑制HIV-1復(fù)制，使CD4細(xì)胞數(shù)量增加，在抗HIV-1感染中取得了一定效果。然而由于這些抗病毒藥物價(jià)格昂貴、毒副作用大、HIV-1耐藥株的產(chǎn)生以及患者依從性不好影響了抗病毒治療。因此最終需要一種有效的疫苗來控制HIV-1的流行和傳播。 大量研究表明細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)應(yīng)答在控制HIV-1和SIV復(fù)制中發(fā)揮重要作用。因而誘導(dǎo)強(qiáng)烈

2、的CTL應(yīng)答成為HIV-1疫苗首要考慮的因素。Nef蛋白是HIV早期表達(dá)的蛋白質(zhì)之一，同時(shí)也是HIV-1感染后CTL最早識別并產(chǎn)生應(yīng)答的靶蛋白?，F(xiàn)已證實(shí)其能夠通過激活CD4淋巴細(xì)胞，提高病毒顆粒的感染性，增加CD4分子和MHC分子的內(nèi)吞，以及防止受感染細(xì)胞凋亡等多種途徑對HIV的復(fù)制起到重要的促進(jìn)作用。 本研究入組57例HIV-1B亞型慢性感染者/AIDS患者，對CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)、病毒載量進(jìn)行檢測，并采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)吸附試驗(yàn)(EL

3、ISpot)和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色方法(ICS)檢測HIV-1Nef特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答，對中國人群HIV-1Nef蛋白特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)進(jìn)行了較全面的研究。 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1.用ICS方法對HIV-1B亞型蛋白水平特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，Nef蛋白在所有5個(gè)肽池的特異性CD8+T細(xì)胞百分比中位列第三，僅次于Pol和Gag蛋白。Nef蛋白特異性CD8+T細(xì)胞百分比與其他4個(gè)肽池間均沒有明顯差異

4、(P＞0.05)。 2.用ELISpot方法對HIV-1B亞型蛋白水平特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，73.7％的感染者(42/57)能夠?qū)χ辽僖粋€(gè)Nef肽段產(chǎn)生特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。分析得出Nef蛋白中各肽段的特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度與頻率分布情況。整體應(yīng)答強(qiáng)度為1079±1692SFC/106PBMC。單一肽段能夠被識別的頻率不超過30％。HIV-1Nef蛋白特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的平均強(qiáng)度和識別頻率之間具有

5、明顯的相關(guān)性(P=0.024,r=0.432)。運(yùn)用累積反應(yīng)綜合評估Nef特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)答最強(qiáng)的是10號肽段，其涵蓋了11個(gè)已被證實(shí)的CTL表位。 3.對不同個(gè)體整體Nef蛋白特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度與病毒載量及CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HIV-1Nef特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度與病毒載量之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P=0.045,r=-0.297)；HIV-1Nef特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度與C

6、D4細(xì)胞數(shù)量間存在顯著的正相關(guān)性(P=0.024,r=0.332)。 4.在HIV-1B、C亞型交叉應(yīng)答反應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn)73.7％實(shí)驗(yàn)對象(42/57)能夠?qū)亞型Nef肽段產(chǎn)生特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答，而有64.9％(37/57)能夠?qū)亞型肽段產(chǎn)生應(yīng)答，兩者之間沒有顯著差異(P=0.413)。在所有產(chǎn)生應(yīng)答的個(gè)體中能夠同時(shí)識別B、C亞型Nef肽段的比例達(dá)到77％(35/45)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示能夠產(chǎn)生B、C亞型Nef蛋白交叉應(yīng)答反

7、應(yīng)的個(gè)體明顯多于僅識別一種亞型肽段個(gè)體所占比例(P＜0.001)。針對B亞型肽段的應(yīng)答強(qiáng)度為1079±1692SFC/106PBMC，C亞型肽段的應(yīng)答強(qiáng)度為1175±1733SFC/106PBMC，兩者間沒有顯著差異(P=0.563)；研究對象對兩個(gè)亞型肽段的識別數(shù)量間也沒有明顯差異(P=0.499)。 5.在54個(gè)27對合成肽段中，HIV-1特異性CD8+T細(xì)胞能夠針對其中23對無論B還是C亞型的Nef肽段產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。HIV

8、-1特異性CD8+T細(xì)胞僅針對B亞型產(chǎn)生應(yīng)答的肽段是5、6、7號肽段。能夠被同時(shí)識別的兩個(gè)亞型肽段的對數(shù)明顯高于僅被單獨(dú)識別的肽段對數(shù)(P＜0.001)。 6.對HIV-1Nef特異性CD8+T細(xì)胞不同程度識別的B、C亞型肽段標(biāo)準(zhǔn)序列間同源性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)能夠被特異性CD8+T細(xì)胞同時(shí)識別的B、C亞型Nef肽段間氨基酸序列的同源性高于僅能被單獨(dú)識別的B亞型肽段，但兩者之間沒有顯著性差異(P=0.15)。 總之，通過本研究