表沒食子兒茶素沒食子酸酯對UVB誘導人原代表皮黑素細胞光損傷干預作用的研究.pdf

1、背景： 日光中的紫外線(UV)，主要為長波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)，是導致皮膚日曬傷、光老化及皮膚癌的重要因素。UVA能穿透皮膚到達真皮深層，引起免疫抑制，并能介導自由基對DNA的損傷。UVB照射可導致細胞DNA損傷及突變頻率增加，自由基及活性氧的形成，局部及系統免疫抑制。在相同劑量下，UVB的光損傷作用比UVA約大800～1000倍。以往認為黑素瘤的形成主要與UVA相關，但近年來越來越多的流行病學數據和動物實驗提

2、示UVB照射與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。UVB照射引起的細胞DNA損傷表現為DNA光產物在嘧啶位點的形成，其中75％以上為環(huán)丁烷嘧啶二聚體(CPDs)，剩下部分為6-4光產物((6-4)PPs)及其同源異構體。DNA光產物的清除主要通過核苷酸切除修復(NER)途徑，當損傷細胞未能得到完全修復時，殘余光產物能引發(fā)免疫抑制，最終致腫瘤形成。綠茶提取物茶多酚的主要活性成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-

3、gallate，EGCG)有著廣泛的生物學效應，如抗氧化、清除氧自由基、預防腫瘤的發(fā)生和抑制腫瘤細胞增殖等作用。有實驗報道EGCG對UVB誘導細胞內光產物的清除有明顯促進作用，從而可抑制腫瘤的發(fā)生。本實驗組已經就EGCG和UVB干預對HaCaT細胞、人原代成纖維細胞光產物的影響進行了一系列研究，但尚無黑素細胞方面的研究和探討。 目的： 觀察黑素細胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)下人原代表皮黑素細胞的生長情況。觀察UVB誘導人原代表皮黑素

4、細胞光產物形成和清除情況及EGCG對此過程的干預作用，從而對黑素細胞光產物變化情況和EGCG光保護效應進行初探。 材料與方法： 1.人原代表皮黑素細胞的分離和培養(yǎng)：黑素細胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)人原代黑素細胞，觀察其生長情況。定量接種于培養(yǎng)皿或96孔板中進行下步實驗； 2.紫外線照射和EGCG干預處理：根據實驗設計定時定量照射培養(yǎng)細胞，并預先或在UVB照射后加入藥物進行干預處理； 3.細胞損傷的形態(tài)學觀察：光學顯

5、微鏡觀察紫外線照射對細胞形態(tài)學的影響； 4.藥物濃度篩選：MTT法檢測細胞增殖活性，以定量無細胞毒性的實驗用藥物濃度； 5.光損傷產物形成及清除檢測：采用免疫熒光法和免疫細胞化學法定性檢測，免疫斑點印跡法定量分析胸腺嘧啶二聚體(CPDs)的形成和清除情況； 6.流式細胞術檢測UVB、EGCG處理對MC凋亡和細胞周期捕獲的影響。 結論： 黑素細胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)人原代黑素細胞生長良好，可替代傳統的黑素