表沒食子兒茶素沒食子酸酯降血糖作用及其機(jī)制初步探討.pdf

1、目的：研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）體外α-葡萄糖苷酶抑制活性及體內(nèi)的降血糖作用，初步探討在降血糖方面的作用機(jī)制。方法：①分別以麥芽糖和PNPG 為底物，采用葡萄糖氧化酶法和PNPG 法，測(cè)定EGCG 酶活抑制率及半數(shù)抑制濃度（IC50）值。再以麥芽糖為底物，建立離體小腸評(píng)價(jià)體系；測(cè)定其在該反應(yīng)體系下的酶活抑制率及半數(shù)抑制濃度（IC50）值。以阿卡波糖作為陽性對(duì)照藥,比較不同底物及酶源對(duì)EGCG 抑制酶活的影響。按照Linew

2、eaver-Burk 作圖法，判斷抑制作用類型。體外實(shí)驗(yàn)與十五種中草藥比較對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性大小。②采用高脂高糖飼料連續(xù)10 周喂養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生糖調(diào)節(jié)受損大鼠模型。以阿卡波糖作為陽性對(duì)照，通過口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)，觀測(cè)空腹血糖、餐后血糖、胰島素水平、血清總膽固醇和甘油三酯的變化，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)。用劑量分別為0.2、0.7和1.0 g/kg.d 連續(xù)灌胃3天，進(jìn)行麥芽糖負(fù)荷實(shí)驗(yàn)。并以20、50、200mg/kg.d 三個(gè)劑量對(duì)大鼠

3、連續(xù)灌胃6 周，分別于灌胃第2和4 周進(jìn)行麥芽糖耐量實(shí)驗(yàn)，以觀測(cè)EGCG 對(duì)大鼠空腹血糖及餐后血糖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死大鼠取其肝臟、腎臟、心臟和脂肪等，分別計(jì)算各臟器指數(shù)；同時(shí)，測(cè)定空腹血糖、血清總膽固醇、甘油三酯、高密度和低密度脂蛋白膽固醇、肝糖原、肌糖原和肌酐等指標(biāo)。結(jié)果：①本研究最終確定酶濃度為0.5mg/ml和麥芽糖濃度為0.06mol/L 為體外和離體小腸酶最適反應(yīng)體系；測(cè)定EGCG 對(duì)兩種底物的IC50 值分別為0.15

4、0 mg/ml和2.594mg/ml；對(duì)離體小腸酶的IC50值為0.837mg/ml。并且是酵母α-葡萄糖苷酶的非競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，其Km=0.1518mol/L,Ki=0.4003mg/ml；其在體外的α-葡萄糖苷酶抑制活性強(qiáng)于十五種中草藥。②短期改善糖調(diào)節(jié)受損大鼠的餐后血糖及糖耐量作用不明顯，第2 周時(shí)，觀測(cè)保護(hù)效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，表沒食子兒茶素沒食子酸酯的中、高劑量組（50、200mg/kg.d）的大鼠空腹血糖、血清總膽固醇、甘油三酯、低