鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類藥物雙圈耐藥現(xiàn)象的研究.pdf

1、鮑曼不動桿菌是導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染的一種重要的條件致病菌,尤其是在重癥監(jiān)護病房(ICU)的病人中。引起院內(nèi)感染的病原菌多數(shù)為耐藥菌,對包括β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類及喹諾酮類在內(nèi)的多種抗生素均耐藥,因此給臨床治療造成極大的困難。
　　 氨基糖苷類抗生素臨床應(yīng)用廣泛,尤其是在治療革蘭陰性菌引起的危重感染時。該抗生素通過與原核生物30S核糖體亞基16S rRNA高度保守的A位點結(jié)合而阻礙蛋白質(zhì)的合成,繼而導(dǎo)致細菌死亡。耐該類抗生素的機制主要

2、包括產(chǎn)氨基糖苷修飾酶、作用靶位改變、膜通透性降低和外排系統(tǒng)導(dǎo)致的細胞內(nèi)藥物濃度降低等多種因素。
　　 本文旨在探討在K-B法藥物敏感試驗中對氨基糖苷類抗菌藥物雙圈耐藥的鮑曼不動桿菌耐藥基因攜帶狀況、藥物誘導(dǎo)對耐藥基因mRNA表達量的影響以及全自動微生物鑒定及藥敏分析儀VITEK2 Compact檢測鮑曼不動桿菌對阿米卡星藥物敏感試驗的準確性及造成檢測誤差的原因。我們用PCR擴增法對編碼整合子酶的基因和整合子可變區(qū)進行擴增,并聯(lián)合

3、RFLP和DNA測序技術(shù)分析可變區(qū)耐藥基因。同時對4種常見的氨基糖苷修飾酶基因及3種16S rRNA甲基化酶基因armA,rmtB及rmtC進行擴增,對擴增結(jié)果為陽性的基因利用RT-PCR的方法分析阿米卡星誘導(dǎo)前后耐藥基因表達量。結(jié)果發(fā)現(xiàn):85.7％(48/56)的雙圈耐藥菌株檢測到Ⅰ類整合子,RFLP分型和DNA測序結(jié)果表明,整合子可變區(qū)攜帶的基因盒為aacA4-catB-aadA1,aacC1-orfX-aadA1及dfrA17-a

4、adA5。36株檢測出aacA4,10株檢測出aacC1,5株檢測出aacC2,所有菌株均未檢測出aphA6,其中2株同時檢出aacA4和aacC2。所有雙圈耐藥菌株均檢測到armA基因,未檢測到rmtB及rmtC,敏感菌株和普通耐藥菌檢測3種甲基化酶基因均為陰性。RT-PCR結(jié)果顯示經(jīng)阿米卡星誘導(dǎo)后細菌armA基因tuRNA表達量顯著上升。VITEK2 Compact檢測鮑曼不動桿菌對阿米卡星藥物的結(jié)果誤差主要出現(xiàn)在K-B法表型為雙圈

5、耐藥的菌株,這些菌幾乎均被誤判為敏感。
　　 由此我們得出的結(jié)論:介導(dǎo)鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類藥物雙圈耐藥的主要原因并非整合子可變區(qū)基因盒而是armA基因,該基因通過誘導(dǎo)表達產(chǎn)生的甲基化酶導(dǎo)致16S rRNA甲基化從而阻礙阿米卡星與藥物靶位結(jié)合。此外,armA基因陽性的雙圈耐藥菌株在液體培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的細菌濁度較低,VITEK2 Compact檢測儀進行吸光度掃描時無法判定為細菌生長,誤判為細菌生長被抑制,影響了臨床報告的準確性