多重耐藥鮑曼不動桿菌關(guān)鍵耐藥基因的研究.pdf

1、目的：了解皖北地區(qū)3家教學(xué)醫(yī)院臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥情況，探討其關(guān)鍵耐藥分子機制：β-內(nèi)酰胺水解酶及主動外排機制，為臨床抗菌藥物治療提供合理的指導(dǎo)和參考。
　　方法：收集皖北地區(qū)3家教學(xué)醫(yī)院2010年3月至2012年3月多重耐藥鮑曼不動桿菌無重復(fù)分離株共43株，采用全自動細(xì)菌鑒定與藥敏分析儀對收集菌株進行種屬鑒定并測定其對15種抗菌藥物的敏感性，采用PCR方法對關(guān)鍵的β-內(nèi)酰胺酶基因（包括TEM、IMP、VIM、OX

2、A-23、ISAba1-OXA-23）和外排泵基因AdeB進行了篩選，并對擴增產(chǎn)物進行測序分析；采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測AdeB基因的mRNA表達(dá)水平，分析其表達(dá)與細(xì)菌耐藥性之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.43株非重復(fù)鮑曼不動桿菌病室來源以重癥監(jiān)護室最多（26株），其余為呼吸內(nèi)科（5株）、神經(jīng)外科（3株）、神經(jīng)內(nèi)科（2株）、燒傷整形科（2株），剩余5株來源于其他科室。標(biāo)本來源分布情況：36株（83.7％）來源于

3、痰液，4株來源于分泌物，其余3株分別來源于血液、腦脊液和尿液。
　　2.15種抗菌藥物中，臨床常用藥物（阿米卡星、環(huán)丙沙星、慶大霉素、頭孢曲松、左氧氟沙星等）的耐藥率均達(dá)到95%以上，碳青霉烯類抗生素（亞胺培南、美羅培南）有較高的耐藥率，均為81.4%，頭孢哌酮舒巴坦耐藥率為69.8%，多粘菌素E耐藥率為7.0%，替加環(huán)素為4.7%，利福平為16.3%。
　　3.耐藥基因檢測：43株多耐藥鮑曼不動桿菌中TEM陽性株數(shù)41株，

4、陽性率95.3%；35株碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌中IMP、VIM、OXA-23、ISAba1-OXA-23的陽性株數(shù)分別為20株、1株、29株、25株，陽性率分別為57.1%、2.9％、82.9%、71.4%，29株OXA-23基因中25株上游檢測到插入序列ISAba1，ISAba1-OXA-23經(jīng)測序比對，與Genbank上的該序列同源性為100%。
　　4.外排基因AdeB基因檢測均為陽性，逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）方法檢測

5、AdeB基因表達(dá)水平結(jié)果：碳青霉烯耐藥組和碳青霉烯相對敏感組菌株AdeB/GAPDH計算結(jié)果分別為（2.13±0.35）和（0.92±0.16），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。碳青霉烯類抗生素耐藥組的AdeB基因mRNA水平高于相對敏感組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.皖北地區(qū)3家教學(xué)醫(yī)院的臨床分離的鮑曼不動桿菌耐藥情況較為嚴(yán)重，是值得關(guān)注的醫(yī)院感染病原菌，其中以ICU臨床分離率最高，呼吸系統(tǒng)感染更為常見。本地不

6、動桿菌對多粘菌素、替加環(huán)素等耐藥率仍較低，可作為臨床治療備選藥物。
　　2.本地鮑曼不動桿菌檢測出β-內(nèi)酰胺類藥物水解酶主要包括：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶blaTEM、金屬酶blaVIM和blaIMP以及碳青霉烯酶blaOXA-23。
　　3.本地鮑曼不動桿菌攜帶的blaOXA-23碳青霉烯酶基因序列上游普遍含有插入序列ISAba1，其比例為86.2%。
　　4.主動外排基因AdeB的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與碳青霉烯類耐藥關(guān)系密切