新型鐵螯合劑CHGN2957對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、缺血性再灌注損傷(IRI)是缺血性急性腎功能衰竭的重要損傷環(huán)節(jié)，又是腎移植中不可避免的病理生理過(guò)程，不僅會(huì)引起移植腎功能延遲恢復(fù)(DGF)，而且使移植腎長(zhǎng)期存活率明顯降低。腎IRI時(shí)，活性氧(ROS)的大量產(chǎn)生，超過(guò)機(jī)體清除能力，使體內(nèi)還原物質(zhì)被消耗，即可通過(guò)多種途徑直接損傷組織和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究采用CHGN2957是一種新型鐵螯合劑。早先的體外實(shí)驗(yàn)表明其在調(diào)節(jié)鐵的傳遞，抑制ROS的信號(hào)途徑中扮演了重要角色，具有抑制ROS產(chǎn)生的作用

2、。本課題分為兩部分：第一部分建立大鼠急性腎熱IRI模型；第二部分采用CHGN2957對(duì)發(fā)生腎IRI大鼠進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)，以期探索其可能的腎保護(hù)作用。 第一部分：大鼠急性腎熱缺血再灌注損傷模型的建立　　目的：建立一個(gè)簡(jiǎn)便、成功率高且穩(wěn)定的大鼠急性腎熱IRI模型。 方法：選用雄性SD大鼠36只，12～14周齡，體重240～260g。隨機(jī)分成6組，每組6只：假手術(shù)組(Sham組)、腎IRI30min組、40min組、50min組

3、、60min組、90min組。制作不同熱缺血時(shí)間大鼠急性單腎IRI模型。建模成功后觀察動(dòng)物死亡率、體重變化，測(cè)定腎功能包括血清尿素氮、血清肌酐、尿24h肌酐，計(jì)算24h肌酐清除率并進(jìn)行腎組織病理切片觀察。 結(jié)果：Sham組死亡率為0，各項(xiàng)腎功能指標(biāo)正常。腎IRI30min組和40min組死亡率為0，術(shù)后第3天血、尿腎功能指標(biāo)顯示輕度的急性腎功能不全，術(shù)后1周已基本恢復(fù)或接近正常水平。而腎IRI50min組及50min以上組，各項(xiàng)

4、腎功能指標(biāo)明顯惡化，出現(xiàn)明顯的急性腎功能不全表現(xiàn)，且隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，腎功能障礙的程度逐漸加重，甚至出現(xiàn)多器官功能衰竭而死亡。50min組死亡率16.7％，60min組和90min組死亡率分別為50.0％、66.7％。病理顯示Sham組基本正常，而腎IRI各組存在不同程度的腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死，其內(nèi)可見(jiàn)細(xì)胞管型或蛋白管型，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并隨腎IRI時(shí)間的延長(zhǎng)，腎小管壞死的區(qū)域和程度加重。腎IRI90min組的腎小管壞死區(qū)域大于

5、80％，且有大量的出血。 小結(jié)：在成功的大鼠急性腎熱IRI模型中，腎缺血時(shí)間以50min為宜；少于50min，腎組織損害較輕，自行恢復(fù)較快；而大于50min，腎組織損害較重，往往不能恢復(fù)造成大鼠死亡，后兩者均不利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)。因此，大鼠腎IRI50min模型是一個(gè)較為簡(jiǎn)便、穩(wěn)定且成功率高的大鼠急性腎熱IRI模型，為進(jìn)一步研究大鼠腎IRI的藥物干預(yù)提供了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 第二部分：新型鐵螯合劑CHGN2957對(duì)大鼠腎I

6、RI的干預(yù)研究。 目的：采用新型鐵螯合劑CHGN2957對(duì)大鼠腎IRI進(jìn)行干預(yù)，以期探索其在腎IRI急性期可能的腎保護(hù)作用，并為進(jìn)一步發(fā)展此類化合物提供實(shí)踐支持。 方法：選用雄性SD大鼠90只，12～14周齡，體重240～260g。隨機(jī)分成5組，每組18只：假手術(shù)組(Sham組)、CHGN2957高劑量組(2.5mg/kg/d)、CHGN2957低劑量組(1.25mg/kg/d)、CHGN2957溶劑組(Vehicle)

7、和陽(yáng)性對(duì)照組(IRFI01625mg/kg/d)。分別制作大鼠急性腎熱IRI50min模型。所有藥物干預(yù)均從手術(shù)前2天開(kāi)始，直至手術(shù)后12天結(jié)束。固定每天上午9點(diǎn)經(jīng)腹腔內(nèi)注射途徑一次給藥。建模成功后觀察動(dòng)物存活率、體重變化；測(cè)定腎功能包括血清尿素氮、血清肌酐、尿24h肌酐，計(jì)算24h肌酐清除率；測(cè)定腎組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)還原酶活力和丙二醛(MDA)含量并進(jìn)行腎組織病理切片觀察。 結(jié)果：動(dòng)物死亡或處死

8、共17只，死亡率18.9％(17/90)。術(shù)后第3天，CHGN2957溶劑組的體重、各項(xiàng)血、尿。腎功能指標(biāo)、SOD活力和GSH還原酶明顯差于其它各組，而MDA含量明顯高于其它各組。而隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)，CHGN2957高、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的體重均開(kāi)始回升，腎功能指標(biāo)逐漸接近基礎(chǔ)值或Sham組水平。病理切片顯示，術(shù)后第3天， Sham組的腎組織結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯異常改變。腎IRI各組大鼠的腎小管上皮細(xì)胞變性壞死，間質(zhì)充血水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

9、CHGN2957溶劑組的腎小管壞死區(qū)域和程度相對(duì)更重。病理評(píng)分顯示，CHGN溶劑組的腎小管損傷明顯重于其它各組；CHGN2957高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組間，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：CHGN2957低劑量組的腎小管損傷輕于CHGN2957溶劑組，但重于其它各組。 小結(jié)：進(jìn)一步證明大鼠急性單腎熱IRI50min模型是一種簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、可靠的腎IRI動(dòng)物模型，可提供給腎IRI研究使用。CHGN2957作為一種新型鐵螯合劑，高劑量組(2.5mg/