Bin1-b在少弱精子癥模型大鼠附睪中的表達(dá)和該抗體對(duì)精子功能的研究.pdf

1、本研究分文二部分： 第一部分、Bin1-b蛋白及mRNA在少弱精子癥模型大鼠附睪中的表達(dá)。 目的：驗(yàn)證Bin1-b蛋白及其mRNA在少弱精子癥模型大鼠附睪中的表達(dá)，探討B(tài)in1-b在病理狀態(tài)下的附睪中表達(dá)的改變。 方法：取雄性大鼠30只，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組給予雷公藤（10mg/kg/d）灌胃，連用8周造成少弱精子癥模型；對(duì)照組給予1％羧甲基纖維鈉混懸液灌胃。采用免疫組化S-P法和原位雜交方法檢測(cè)Bin1-b蛋白

2、和Bin1-b mRNA在兩組大鼠附睪組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果：Bin1-b蛋白和mRNA表達(dá)于對(duì)照組、模型組大鼠的附睪管腔上皮、主細(xì)胞、基細(xì)胞，但模型組中的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.05）。 結(jié)論：Bin1-b蛋白及其mRNA在少弱精子癥大鼠附睪內(nèi)表達(dá)較正常大鼠明顯增強(qiáng)，該結(jié)果提示Bin1-b可能是病理狀態(tài)下雄性大鼠生殖系統(tǒng)的內(nèi)源性防御分子之一。 第二部分、Bin1-b多克隆抗體對(duì)人類精子功能的影響 目的：

3、觀察Bin1-b抗體與精子結(jié)合情況和抗體對(duì)精子線粒體、運(yùn)動(dòng)能力、體外獲能、頂體反應(yīng)等功能的影響，探討B(tài)in1-b對(duì)精子在附睪中發(fā)育、成熟、獲能和受精能力所起的作用。 方法：按世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)選取正常精液標(biāo)本，經(jīng)上游優(yōu)化，與抗Bin1-b多克隆抗體（終濃度為1:200）孵育，熒光顯微鏡觀察抗Bin1-b多克隆抗體與人精子結(jié)合情況，用CASA系統(tǒng)檢測(cè)抗體對(duì)精子活力的影響，金霉素染色觀察抗體對(duì)體外獲能的影響，考馬斯亮蘭R250染色觀察

4、抗體對(duì)頂體反應(yīng)的影響，JC－1熒光染色流式細(xì)胞檢測(cè)儀觀察抗體對(duì)精子線粒體功能的影響。 結(jié)果： 1、實(shí)驗(yàn)所用的抗Bin1-b多克隆抗體與人精子結(jié)合于精子頭部，未發(fā)現(xiàn)非特異性結(jié)合。 2、精子和終濃度為1:200的Bin1-b抗體體外培養(yǎng)1h、2h、4h后，活力下降，與對(duì)照組相比，各時(shí)間點(diǎn)的差異均有顯著性意義（P<0.05或P<0.001）。 3、抗體處理組線粒體高膜電位精子數(shù)減少，與對(duì)照組相比，差異有顯著性意