弱精癥精子蛋白質(zhì)差異表達(dá)變化及其在弱精癥中可能作用研究.pdf

1、研究目的：
　　1)通過采用相對和絕對定量的等量異位標(biāo)簽(isobaric tags for relative andabsolute quantitation，iTRAQ)+二維高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(two-dimensional-liquid chromatography coupled by tandem mass spectrometry，2D-LC-MS/MS)方法標(biāo)記、檢測、鑒定分析精子蛋白質(zhì)，試圖獲得較其他研究

2、方法更加全面的精子蛋白質(zhì)生物學(xué)信息；
　　2)通過比較精子蛋白質(zhì)在正常組以及輕度、中度、重度弱精癥組中的動態(tài)表達(dá)變化，探索精子蛋白質(zhì)差異表達(dá)在弱精子癥的作用；
　　3)分析不同程度弱精子癥生殖相關(guān)精子蛋白的變化情況，探討涉及生殖過程蛋白質(zhì)在弱精癥中的變化規(guī)律。
　　研究內(nèi)容和方法：
　　用iTRAQ)+2D-LC-MS/MS方法研究蛋白質(zhì)表達(dá)變化在成人弱精癥中的作用及其可能機制。收集正常精子以及弱精子癥精子(分為

3、輕、中、重度)，采用iTRAQ方法行蛋白標(biāo)記，混合樣品后用2D-LC-MS/MS行蛋白質(zhì)組鑒定和差異定量分析。蛋白質(zhì)表達(dá)情況所定量的蛋白通過基因和蛋白分類網(wǎng)站行在線蛋白檢索，對所定量蛋白進行功能注釋和蛋白分類。
　　研究結(jié)果：
　　1)本研究收集142例成年男性精液標(biāo)本，其中正常91例，輕度弱精癥22例，中度弱精癥18例，重度弱精癥11例，四組患者年齡、禁欲時間以及精子形態(tài)等無顯著差別(P>0.05)。
　　2)共鑒定

4、了1073個蛋白質(zhì)，顯著改變(與正常組比表達(dá)上調(diào)和下調(diào)在兩倍或以上)蛋白質(zhì)數(shù)目為511個。包括分子功能相關(guān)蛋白、生物過程相關(guān)蛋白、細(xì)胞成分、蛋白質(zhì)分類成分以及生物途徑蛋白。分子功能蛋白以催化蛋白、結(jié)合蛋白和分子結(jié)構(gòu)蛋白為主，生物過程蛋白以代謝過程、細(xì)胞過程、免疫反應(yīng)過程及細(xì)胞通訊過程蛋白質(zhì)為主，細(xì)胞成分蛋白質(zhì)中大部分是細(xì)胞內(nèi)成分，少量胞漿蛋白質(zhì)。
　　3)輕度、中度、重度弱精癥組顯著上調(diào)和下調(diào)表達(dá)改變的蛋白質(zhì)數(shù)量分別為108和19

5、3、31和282、38和211個，上調(diào)和下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)數(shù)量在弱精子癥組存在明顯差別(P<0.05)。其中，共有104個和10個蛋白在輕、中、重度三組中均呈顯著下調(diào)和上調(diào)表達(dá)。
　　4)在1073個蛋白質(zhì)中，涉及生殖(reproduction，GO：0000003)生物過程的蛋白48個，在輕、中、重度弱精癥組呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律。
　　研究結(jié)論：
　　1)iTRAQ標(biāo)記能很好的應(yīng)用于弱精癥精子蛋白質(zhì)研究，可以獲得較2-D