葛根素對同型半胱氨酸誘導的骨髓間充質干細胞損傷的干預研究.pdf

1、目的：觀察葛根素對大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)增殖、分化能力的影響,探討葛根素(Pue)對同型半胱氨酸(Hcy)誘導MSCs的損傷的保護作用及其機制。
　　 方法：①全骨髓細胞自然貼壁法分離大鼠四肢骨MSCs,以細胞的形態(tài)特征及具有體外誘導分化為成骨細胞的能力來鑒定MSCs,采用第三、四代細胞進行實驗。②隨機將細胞分為空白對照組、葛根素(10-7～1 mmol/L,Pue)組和同型半胱氨酸(0.01-20mmol/L,Hcy

2、)組,分別觀察細胞1～4d的增殖及誘導分化,2、4、6、8d的ALP活性。③上述不同濃度葛根素和同型半胱氨酸；預孵育SMCs48h.測定細胞內的微量丙二醛(mMDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化能力(T-AOC)。④用上述不同濃度葛根素預孵育MSCs48h,加入10mmol/L Hcy繼續(xù)孵育24h(Pue+Hcy10組)；用10mmol/L Hcy預孵育24h,換不同濃度葛根素孵48h(Hcy10+Pue組),分別測定各組

3、細胞的MTT與ALP活性。⑤先以10-2mmol/LPue孵育SMCs48h,再加(Hcy10+Pue10-2組)或不加(Pue10-2組)10mmol/LHcy24h后測定細胞內的mMDA含量、SOD和T-AOC活性,并與空白組和單純Hcy10組對照。
　　 結果：1.Pue對MSCs的影響:①對增殖、分化的影響:與對照組相比,10-5～10-2mmol/L葛根素MTT值和ALP活性均增加(P<0.01),且組間兩兩比較以10

4、-2mmol/L Pue組最高。1mmol/L Pue組最低且低于對照組。②對氧化指標的影響:與對照組相比,10-3～10-1mmol/L Pue mMDA含量下降,而SOD和T-AOC升高,均以10-2mmol/L Pue最顯著(P<0.01)。2.Hcy對MSCs的影響:①對增殖、分化的影響:在低濃度(0.05～0.5mmol/L)時,MTT值(P<0.05)、ALP活性較正常對照組明顯升高(P<0.01)。在高濃度(5～20mmo

5、l/L)時MTT值、ALp活性明顯降低(P<0.01),均以0.5mmol/L升高最顯著(P<0.001)；②對氧化指標的影響:各組mMDA含量升高(20mmol/L除外),SOD和T-AOC下降。均以0.5mmol/L Hcy最顯著(P<0.01)。3.Pue對Hcy10損傷MSCs增殖和分化的影響:與Hcy10組比較,Pue+Hcy10和Hcy10+Pue組中10-4～10-2 mmol/L Pue使受損MSCs的MTT值升高(P<

6、0.01)；10-5～10-2mmol/LPue使ALP活性增加(P<0.01),都以10-2mmol/L影響更為顯著(P<0.001),且損傷前加入Pue能起到更好的保護作用(P<0.01)。4.Pue對Hcy10損傷MSCs氧化指標的影響:與對照組相比,10mmol/LHcy組的mMDA含量顯著增加而SOD和T-AOC顯著降低(P<0.01):Pue使受損MSCs的mMDA含量顯著減少(P<0.01),而SOD活性和T-AOC則顯著