葉酸對同型半胱氨酸誘導(dǎo)成骨細(xì)胞損傷的干預(yù)研究.pdf

1、目的:觀察葉酸(FA)和同型半胱氨酸(Hcy)在體外對大鼠成骨細(xì)胞(OB)增殖、分化和礦化功能的影響,探討FA對Hcy誘導(dǎo)OB氧化損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 1.用酶消化法分離培養(yǎng)新生大鼠顱骨OB,觀察細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)特點及成骨特性,以堿性磷酸酶(ALP)染色和礦化結(jié)節(jié)染色等鑒定OB。
　　 2.采用第二代細(xì)胞,接種24h后,隨機(jī)將細(xì)胞分為正常對照組、FA(10-10～10-2mol/L)組和Hcy(1

2、×10-6～5×10-3 mol/L)組,應(yīng)用MTT比色法分別觀察第1～4細(xì)胞的增殖,醌衍生物比色法檢測誘導(dǎo)分化第2～8d ALP的活性,茜素紅染色法觀察誘導(dǎo)分化第14dFA組的礦化結(jié)節(jié)形成并計數(shù)。
　　 3.Hcy(10-3mol/L)孵育24h對OB造成氧化損傷后,加入前述不同濃度的FA(Hcy+FA組)孵育48h,測定細(xì)胞的增殖與ALP活性,并測定10-5 mol/FA組、10-3mol/L Hcy組、Hcy(10-3mo

3、l/L)+FA(10-5mol/L)組與對照組細(xì)胞內(nèi)的微量丙二醛(mMDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和總抗氧化能力(T-AOC)以及eNOS、iNOS mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.與對照組相比,FA10-6～10-4mol/L組的MTT值增加(p<0.01),以10-5mol/L組增加最明顯；10-9～10-4 mol/L的ALP活性(p<0.01)和礦化結(jié)節(jié)的形成(p<0.05)均增加,以10-

4、7mol/L組增加為顯；10-3～10-2mol/L組MTT值A(chǔ)LP活性及礦化結(jié)節(jié)的形成均顯著降低(p<0.01)。
　　 2.Hcy組在1×10-6、5×10-5mol/L時,MTT值、ALP活性無明顯變化,當(dāng)濃度>5×10-4 mol/L時,較對照組MTT值、ALP活性顯著降低(p<0.01)。
　　 3.與Hcy組相比較,Hcy+FA組中10-4～10-3mol/L組MTT值升高(p<0.01)；10-6～10-2

5、 mol/L組ALP活性增加(p<0.01),10-5mol/L組為著。
　　 4.與對照組相比,Hcy組的mMDA含量顯著增加,SOD活性和T-AOC顯著降低(均<0.01)；Hcy+FA組較Hcy組,mMDA含量顯著減少(p<0.01),SOD活性(p<0.01)和T-AOC(p<0.05)顯著增加。
　　 5.與對照組相比,eNOS mRNA的表達(dá)在FA組明顯增高,Hcy組顯著降低(均p<0.01)；Hcy+FA組