肺癌診斷試劑與分子影像造影劑的研制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:對于肺癌早期篩查和診斷,利用特異性與靈敏性較高的NSE、CYFRA21-1等肺癌相關標記物,采用斑點免疫雜交和混合ELISA技術(shù)研制肺癌體外聯(lián)合診斷 ELISA試劑盒;對于中晚期肺癌轉(zhuǎn)移與預后的判斷,利用本實驗前期篩選獲得的肺癌靶向結(jié)合多肽,經(jīng)過化學修飾與結(jié)構(gòu)優(yōu)化,標記核素[18F],研制出新型肺癌體內(nèi)診斷分子顯像劑,為中晚期肺癌的臨床預后轉(zhuǎn)歸、病程分子等判斷、分子分型和個性化治療提供更為準確的技術(shù)手段。
  方法:利用斑點

2、免疫雜交原理,在硝酸纖維素膜上篩查肺癌相關的多種相關標記物,發(fā)現(xiàn)標記物中NSE、CYFRA21-1兩兩組合對肺癌的診斷率最高,將NSE、CYFRA21-1兩種抗原的抗體按一定比例組合包被到酶標板的板底,考察包被液、包被時間、包被溫度、包被保護液等因素,已達到試劑盒中酶標板的高效、穩(wěn)定,同時考察檢測抗體保護液的配方組成,顯色液的反應等因素使整個雙顯色ELISA試劑盒更加穩(wěn)定,確診率更高。
  通過化學方法合成多肽修飾化合物(ZP)并

3、標記異硫氰酸(FITC)熒光素。以不同肺癌、肺部疾病和肺部正常組織芯片鑒定多肽修飾化合物對肺癌的診斷陽性率情況;將ZP經(jīng)尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內(nèi),取心、肝、脾、肺、腎、腦、腫瘤組織,冰凍切片,觀察ZP在不同組織中的熒光強度,確定其在體內(nèi)的靶向性分布;用核素[18F]標記ZP,制備化合物[18F]-ZP,將化合物注入荷瘤裸鼠體內(nèi),進行PET/CT全身成像,考察[18F]-ZP在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布、代謝情況。
  結(jié)果:NSE、CYF

4、RA21-1肺癌雙顯色ELISA診斷試劑盒4℃放置有效期為6個月。試劑盒CYFRA21-1灰區(qū)吸光度(OD)值范圍就是0至0.38478之間,遇灰區(qū)患者是為可疑要復查。試劑盒CYFRA21-1正常值范圍0至24.08ng/mL;試劑盒NSE灰區(qū)吸光度(OD)值范圍就是0至0.4145之間,遇灰區(qū)患者是為可疑要復查。正常值范圍0至9.8ng/mL。試劑盒靈敏性83.8%(129/154)、特異性53.8%(57/106)、準確性71.5%

5、(186/260)。
  作為分子影像造影劑的化合物ZP合成產(chǎn)率高、純度高;ZP-FITC肺癌組織芯片檢測ZP的靈敏性50%(35/70)、特異性60%(3/5)、準確性50.7%(38/75),ZP-FITC裸鼠體內(nèi)在肺鱗癌和肺腺癌組織分布相比于其他組織明顯偏高。核素[18F]標記 ZP過程可靠、技術(shù)成熟,將化合物注入荷瘤裸鼠體內(nèi),進行 PET/CT全身成像,當注射后,腫瘤組織顯像最為明顯,將為肺癌的分子影像診斷和分子分型提供可

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