與SNSRH相關(guān)的主韌帶精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)的定性及定量研究.pdf

1、隨著宮頸癌患者的日趨年輕化及術(shù)后生存率的提高,改善患者術(shù)后生活質(zhì)量已成為宮頸癌治療的發(fā)展趨勢。經(jīng)典的宮頸癌根治術(shù)歷經(jīng)百余年的歷史目前向保留器官生理功能的階段發(fā)展,系統(tǒng)保留盆腔自主神經(jīng)的根治性子宮切除術(shù)(SystematicNerve-sparingradicalhysterectomy,SNSRH)應(yīng)勢而生。SNSRH手術(shù)的經(jīng)典術(shù)式是“Tokyo術(shù)式”,即“東京術(shù)式”,該術(shù)式術(shù)中保留神經(jīng)的關(guān)鍵是對主韌帶(Cardinalligament

2、,CL)的處理。本課題收集Ⅲ型子宮切除術(shù)后的離體主韌帶標(biāo)本,詳細(xì)進(jìn)行標(biāo)本切分,采用HE染色、免疫組織化學(xué)染色及特殊染色方法進(jìn)行定性研究,以期闡明主韌帶的精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)特征。同時,利用生物體視學(xué)方法對主韌帶各部、各段中的重要組成成份進(jìn)行定量測定,提供量化數(shù)值。從而在微觀水平,為臨床提供主韌帶的組織形態(tài)學(xué)實驗數(shù)據(jù)。
　　 本研究分兩部分進(jìn)行,具體如下:
　　 第一部分主韌帶精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)的定性研究[目的]研究主韌帶的精細(xì)

3、顯微組織結(jié)構(gòu)特征。
　　 [方法]
　　 收集13例Ⅲ型子宮切除術(shù)后切除的主韌帶標(biāo)本22條,每條主韌帶標(biāo)本自宮頸附著處由里向外以1cm間距切分為3段,命名為近段、中段和遠(yuǎn)段,近段和中段各1cm,其余為遠(yuǎn)段,共66塊組織。每塊組織經(jīng)10％福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、切片4張,分別運(yùn)用HE染色、免疫組織化學(xué)染色、特殊染色方法對主韌帶各組織成份進(jìn)行定性研究。
　　 [結(jié)果]
　　 1.HE染色結(jié)果:可見大量纖維

4、結(jié)締組織、脂肪組織；豐富的血管(包括中、小、微動靜脈)、神經(jīng)組織；散在淋巴管；偶見淋巴組織和淋巴結(jié)。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色和特殊染色結(jié)果:
　　 1)纖維結(jié)締組織:Masson氏三色染色法的改良法顯示膠原纖維呈天藍(lán)色至深藍(lán)色,肌纖維呈紅色；Unna氏地衣紅染色技術(shù)顯示彈力纖維為棕紅色。主韌帶中膠原纖維含量較多,彈力纖維和肌纖維很少,呈散在分布。
　　 2)神經(jīng)組織:S-100抗體特異標(biāo)記神經(jīng),證實主韌帶中富

5、含神經(jīng)。改良的Loyes氏特殊染色顯示神經(jīng)髓鞘陰性,提示主韌帶內(nèi)的神經(jīng)為自主神經(jīng)。進(jìn)一步用免疫組織化學(xué)染色區(qū)分神經(jīng)類型,TH抗體特異標(biāo)記交感神經(jīng)結(jié)果陽性,VIP抗體特異標(biāo)記副交感神經(jīng)結(jié)果陽性,證明主韌帶中的自主神經(jīng)包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng),還包括交感神經(jīng)節(jié)和副交感神經(jīng)節(jié)。主韌帶中的神經(jīng)較為豐富,呈散在分布,有一定的規(guī)律,相對集中于主韌帶的下半部。
　　 3)血管:特異標(biāo)記血管的CD34抗體免疫組化染色證實主韌帶中存在動靜脈,醛品

6、紅一高碘酸Schiff氏雙染色改良法顯示動脈為玫瑰紅色。主韌帶中的動靜脈均較豐富,可以看到中小微動靜脈,內(nèi)含大量紅細(xì)胞。分布相對集中于主韌帶的上半部。
　　 4)淋巴管:特異標(biāo)記淋巴管抗體D2-40免疫組化染色結(jié)果陽性,淋巴管呈散在分布,無明顯規(guī)律,包括粗細(xì)不等的各級分支。
　　 [小結(jié)]
　　 主韌帶中含大量纖維結(jié)締組織,包括膠原纖維、彈力纖維和肌纖維,以膠原纖維為主；含大量脂肪組織；富含神經(jīng)組織,為自主神經(jīng),

7、包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)以及交感神經(jīng)節(jié)和副交感神經(jīng)節(jié),分布相對集中于主韌帶的下半部；富含各級血管,主要集中于主韌帶的上半部。淋巴管分布分散,包括各級淋巴管；偶見淋巴組織和淋巴結(jié)。
　　 第二部分子宮主韌帶重要組成成份的生物體視學(xué)定量測定[目的]研究主韌帶內(nèi)的交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)、血管及淋巴管的含量及其分布情況。
　　 [方法]
　　 1.主韌帶分部:為方便描述和比較,將主韌帶分為上半部和下半部。撈片時主韌帶切片上

8、緣(近心側(cè))均與玻片的上緣吻合。將玻片置于OLYMPUSBX51型號顯微鏡系統(tǒng),在顯微鏡下找出玻片的上下緣,按照顯微鏡上的刻度值,于正中部位,將主韌帶分為上半部和下半部。與前面取材的近、中、遠(yuǎn)分段共形成6個區(qū)間。
　　 2.圖像采集:玻片置于OLYMPUSBX51型號顯微鏡系統(tǒng),在低倍鏡下選擇視野后轉(zhuǎn)20倍下微調(diào)至圖像清晰,再調(diào)至電腦顯示的圖像清晰后隨機(jī)選擇視野取圖,每張玻片上下半部各隨機(jī)取10個視野,共取20個視野。22條主韌

9、帶交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)、血管和淋巴管各有玻片66張,因此,各指標(biāo)分別采集圖像1320張,共采集圖像5280張。
　　 2.Imagepro圖像分析:將采集的圖像輸入計算機(jī),用Imagepro醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測試陽性觀測指標(biāo)面積,同時測每幅照片面積。
　　 3.體積密度計算:利用生物體視學(xué)公式,體積密度(Vv)=觀測陽性指標(biāo)的測試面積/參照空間面積,計算出各陽性指標(biāo)的體積密度。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)應(yīng)用S

10、PSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,主韌帶上下兩半部各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較采用Independent-SamplesT檢驗。主韌帶上半部和下半部的近、中、遠(yuǎn)段以及主韌帶近、中、遠(yuǎn)段間指標(biāo)數(shù)據(jù)比較采用One-wayANOVA方差分析。
　　 [結(jié)果]
　　 (一)主韌帶內(nèi)的神經(jīng)體積密度(Vv):
　　 2.主韌帶內(nèi)的副交感神經(jīng)體積密度(Vv):

11、　　 3.主韌帶內(nèi)交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的比例為2.8:1。
　　 (二)主韌帶內(nèi)的血管體積密度(Vv):
　　 1)主韌帶內(nèi)血管總體積密度(0.1424±0.1030)。
　　 2)上半部(0.2153±0.0992)和下半部(0.0696±0.0275)；上半部血管體積密度高于下半部(t=5.104,P=0.000)。
　　 3)近段(0.1729±0.1100)、中段(0.1843±0.1119)和

12、遠(yuǎn)段(0.1767±0.0770),三段間血管體積密度無顯著性差異(F=0.043,P=0.958)。
　　 4)上半部近段(0.2289±0.1837)和下半部近段(0.0538±0.0399),上半部血管積密度高于下半部(t=3.358,P=-O.005)；
　　 上半部中段(0.2137±0.1504)和下半部中段(0.0765±0.0441),上半部血管體積密度高于下半部(t=3.157,P=0.007)；

13、>　　 上半部遠(yuǎn)段(0.2034±0.0756)和下半部遠(yuǎn)段(0.0784±0.0443),上半部血管體積密度高于下半部(t=5.144,P=0.000)；
　　 5)上半部近、中、遠(yuǎn)三段間血管體積密度無顯著性差異(F=0.103P=0.902)；
　　 下半部近、中、遠(yuǎn)三段組間血管體積密度無顯著性差異(F=1.327,P=0.278)。
　　 (三)主韌帶內(nèi)的淋巴管體積密度(Vv):
　　 1)主韌帶

14、內(nèi)的淋巴管總體積密度(0.0050±0.0049)。
　　 2)上半部(0.0067±0.0056)和下半部(0.0033±0.0035),兩部間淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.798,P=0.089)。
　　 3)近段(0.0054±0.0062)、中段(0.0044±0.0054)和遠(yuǎn)段(0.0077±0.0085),三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.762,P=0.475)。
　　 4)上半部近

15、段(0.0065±0.0084)和下半部近段(0.0030±0.0043),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.282,P=0.213)上半部中段(0.0044±0.0063)和下半部中段(0.0031±0.0042),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=0.606,P=0.550)；
　　 上半部遠(yuǎn)段(0.0093±0.0019)和下半部遠(yuǎn)段(0.0039+0.0060),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.404,P=0.174

16、)；
　　 5)上半部近、中、遠(yuǎn)三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.842,P=0.440)；
　　 下半部近、中、遠(yuǎn)三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.116,P=0.891)。
　　 [小結(jié)]
　　 (一)自主神經(jīng)的分布:
　　 1.交感神經(jīng)的分布:①下半部>上半部(P=0.039)；
　　 ②中段:下半部>上半部(P=0.019)；
　　 ③下半部由近及遠(yuǎn)有增高趨

17、勢。
　　 2.副交感神經(jīng)的分布:①下半部>上半部(P=0.002)；
　　 ②呈下半部遠(yuǎn)段最多,中段次之,近段最少分布規(guī)律。
　　 3.交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的比例為2.8:1。
　　 (二)血管的分布:
　　 ①上半部>下半部(P=0.000)；
　　 ②中小細(xì)血管均有；
　　 ③近段、中段、遠(yuǎn)段分布無規(guī)律。
　　 (三)淋巴管的分布:
　　 存在于主韌帶各部各段