HLA-B27mRNA表達水平、基因多態(tài)性與強直性脊柱炎關(guān)系的研究.pdf

1、強直性脊柱炎(ankylosing spotldylitis，AS)是一種類風(fēng)濕因子陰性，累及中軸關(guān)節(jié)和肌腱韌帶骨附著點的慢性炎癥性疾病，可引起腰痛、晨僵、脊柱活動受限、駝背畸形、外周關(guān)節(jié)受累、足跟痛等關(guān)節(jié)癥狀以及前葡萄膜炎或虹膜炎、心血管表現(xiàn)、肺部表現(xiàn)、骨質(zhì)疏松等關(guān)節(jié)外癥狀。目前，認為遺傳因素與該病關(guān)系尤為密切，其中HLA-B27又與之尤為密切。目前對HLA-B27的檢測方法眾多，但都存在一定的缺陷或局限性，且無法對AS進行確診。信使

2、核糖核酸(MessengerRNA，mRNA)為由脫氧核糖核酸(DNA)轉(zhuǎn)錄合成的帶有遺傳信息的一類單鏈核糖核酸(RNA)，它在核糖體上作為蛋白質(zhì)合成的模板，決定肽鏈的氨基酸排列順序，與遺傳性疾病的發(fā)生與表達密切相關(guān)。據(jù)國外有關(guān)文獻報道，強直性脊柱炎患者HLA-B27mRNA有著較高的表達水平，且與強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)(BASDAI)密切相關(guān)，因此我們認為采用定量PCR檢測HLA-B27mRNA表達可能成為珍斷AS的另一重要途徑。我

3、們對22例HLA-B27陽性AS患者，5例HLA-B27陰性患者，22例HLA-B27陽性正常人外周靜脈血進行了HLA-B27mRNA表達水平檢測，以期進一步得到之間的聯(lián)系。此外，我們還采用DNA測序儀對HLA-B27陽性AS患者血標本進行B27分子亞型的檢測，以進一步研究mRNA的表達與B27分子亞型之間的聯(lián)系。 實驗中我們首先對門診和病房中可疑AS患者以及AS患者家族成員進行外周靜脈血HLA-B27分子的流式細胞儀的檢測，并

4、結(jié)合臨床癥狀確診22例HLA-B27陽性AS患者，5例HLA-B27陰性患者，22例HLA-B27陽性正常人，并篩選20例HLA-B27陰性正常人外周靜脈血作為對照組。然后對實驗對象外周靜脈血進行Total RNA提取，并用RT-PCR試劑盒對Total RNA進行HLA-B27片段反轉(zhuǎn)錄及mRNA表達水平的相對定量。此外我們對HLA-B27陽性AS患者進行DNA提取，經(jīng)PCR擴增后在DNA測序儀上進行了HLA-B27的DNA測序，與已

5、知的B27亞型序列進行比對，得到標本的亞型。 實驗結(jié)果顯示，以20例HLA-B27陰性對照組測出的HLA-B27mRNA平均表達水平作為參照(即表達水平為1)，22例HLA-B27陽性AS忠者HLA-B27mRNA表達水平最低值為1.16，最高值為37.01，均值為7.77，其中B2704 12例，B270510例，分別為54.5％和45.5％，與文獻報道接近；22例HLA-B27陽性正常人組，最低值為1.05，最高值為2.10

6、，均值為1.51；以及5例HLA-B27陰性患者，HLA-B27mRNA表達水平的均值為1.19。統(tǒng)計結(jié)果顯示HLA-B27 mRNA的表達水平與強直性脊柱炎患者疼痛程度密切相關(guān)，HLA-B27陽性AS患者組HLA-B27mRNA表達水平顯著高于HLA-B27陽性正常人組和HLA-B27陰性對照組，且與亞型無特異性相關(guān)。對比分析HLA-B27陽性AS組與HLA-B27陽性正常組流式細胞儀檢測的熒光強度，結(jié)果顯示，兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0

7、.16>0.05)。5例HLA-B27陰性AS患者HLA-B27mRNA表達水平均值為1.19，接近于B27陰性正常人對照組。因此我們認為采用定量PCR檢測HLA-B27mRNA表達水平可作為輔診AS的另一種重要檢測方法，特別是在鑒別HLA-B27陽性正常人與HLA-B27陽性患者方面有著較明顯的作用，同時檢測HLA-B27 mRNA的表達水平，可以成為另一種考察患者病情的確實有效的方法。此外，5例HLA-B27陰性患者測得的HLA-B