實驗性大鼠羊水栓塞后肺組織TPS和CK16表達的變化及意義.pdf

1、目的：本實驗通過復制AFE大鼠動物模型，在注入不同劑量羊水原液和胎糞混合液引起AFE后，應用類胰蛋白酶（TPS）和角蛋白16（CKl6）免疫組織化學方法觀察羊水栓塞大鼠的肺組織，來研究肥大細胞被激活后TPS量的變化和肺組織內(nèi)中CK16表達的變化，探討肥大細胞參與AFE的病理過程及在AFE中的作用，探討TPS和CK16在AFE死亡法醫(yī)學鑒定中的意義。方法：選用待產(chǎn)的雌性wistar大鼠50只（由第三軍醫(yī)大動物中心提供）。隨機分為3組，分別

2、為對照組（10只，生理鹽水，NS），羊水組（30只，AF），胎糞組（10只，MAF）。建立羊水栓塞動物模型。觀察一定時間后取肺組織，做常規(guī)HE染色和免疫組化做形態(tài)學觀察。結(jié)果：（1）給動物注射不同劑量的羊水原液和胎糞混合液。實驗中發(fā)現(xiàn)按照3.75m1/kg、2.50m1./kg和1.25m1/kg的標準，靜脈注射羊水原液時，大鼠可以存活的時間有明顯差異。按1.25ml/kg注射羊水原液時，動物可以存活1～2h，只有輕微癥狀；按2.5m1

3、/kg靜脈注射羊水原液時，大鼠存活0.5～1h：按照3.75ml/kg注射羊水原液時，大鼠一般在0.5h內(nèi)死亡。按2.5m1/kg靜脈注射1％的胎糞，動物出現(xiàn)的癥狀會更早，癥狀會更急，常常在15～30min內(nèi)死亡。（2）取肺組織做HE染色，對照組未見明顯病理改變。實驗組（AF和MAF）的肺組織有不同程度的水腫，血管擴張。肺小血管及肺泡壁毛細血管可見無結(jié)構(gòu)角化上皮組織、黃色無定形物質(zhì)（胎糞）及毳毛、粘液等羊水成分。有的毛細血管內(nèi)可見透明血

4、栓形成，肺實質(zhì)可見少量出血。在羊水組中血管及支氣管周圍可見大量炎性細胞浸潤，有白細胞（主要為嗜酸性粒細胞）和巨噬細胞。胎糞組的肺組織可見明顯的黃色胎糞。（3）TPS免疫組化染色陰性對照組見少量陽性染色細胞，AF和PAF組TPS染色陽性細胞明顯增多，棕色顆粒存在于細胞漿中。高倍鏡下可以看到在肥大細胞周圍有彌散性的TPS染色陽性的顆粒，顯示肥大細胞的脫顆粒效應。MAF組TPS量明顯多于AF組，P<0.05（見表1）。（4）肺組織CKl6免疫

5、組化：對照組少見陽性染色物質(zhì)，AF和MAF組有大量CK16染色呈陽性，呈棕色絲狀，存在于肺動脈或肺泡周圍毛細血管中，部分肺泡壁也有表達。鏡下觀察到隨著注射量的升高，CK16染色陽性的分布增多，且染色更深。結(jié)論：在這種動物模型中，實驗結(jié)果提示：羊水原液入血的量和成分決定了AFE的癥狀；確認AFE時肺組織內(nèi)有大量CK16表達，同時肥大細胞發(fā)生了脫顆粒反應，TPS陽性物質(zhì)釋放，TPS的表達明顯升高。檢測患者體內(nèi)TPS的變化可能對確診AFE有很