髓系來源抑制細(xì)胞(MDSCs)在小鼠食管癌演進(jìn)過程中的表達(dá)及調(diào)節(jié)的初步分析.pdf

1、目的：利用化學(xué)致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物（4-NQO），通過飲水法誘發(fā)C57BL/6小鼠產(chǎn)生食管鱗狀細(xì)胞癌，對小鼠病理形態(tài)進(jìn)行動態(tài)觀察，同時分析病變小鼠脾臟、外周血和病變組織中髓系來源抑制細(xì)胞（MDSCs）的動態(tài)改變，并初步探討其表達(dá)的可能調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：（1）4-NQO用丙二醇配置成12.5 mg/ml濃度的母液，再用滅菌自來水配置成100μg/ml的飲用濃度，通過飲水法作用于8周齡的雌性C57BL/6小鼠。16周后，

2、改為飲用正常滅菌自來水觀察至第16、20、28、32周時，每個時間段各處死幾只。處死的小鼠取其食管，進(jìn)行肉眼、病理組織學(xué)觀察其腫瘤發(fā)展演進(jìn)情況；（2）在建模過程不同時間點(diǎn)，收集小鼠的外周血、脾臟細(xì)胞和食管病變組織，經(jīng)免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞儀分析技術(shù)，測定小鼠脾臟、外周血和腫瘤組織中CD11b+Gr-1+MDSCs細(xì)胞以及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞在病變演進(jìn)過程中（增生，不典型增生，浸潤性鱗癌）表達(dá)的變化規(guī)律；（3）收集荷

3、瘤小鼠腫瘤組織，經(jīng)Trizol抽提RNA，經(jīng)Real-Time PCR檢測IL-6，IL-1β，TNF-α，S100A8，Arginase1，IL-17和CXCL1等因子在腫瘤組織mRNA水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）飲用含4-NQO的水后數(shù)周，小鼠出現(xiàn)明顯的病變特征，舌粘膜相繼出現(xiàn)白色斑塊、潰瘍，糜爛，顆粒狀新生物及菜花狀新生物等改變；食管可見到有局部腫大，紅腫的癥狀。病理檢測顯示小鼠食管內(nèi)壁經(jīng)歷了單純性上皮增生——不典型增生—

4、—浸潤性癌的經(jīng)典病理性變化：16周時主要表現(xiàn)為中輕度異常增生，20周時見到重度異常增生，28周時可見到浸潤性癌，32周時多為浸潤性癌;（2）CD11b+Gr-1+MDSCs細(xì)胞在食管癌演進(jìn)過程中，在外周血、脾臟和腫瘤組織的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的上調(diào)趨勢。（3）CCL5，CCL6，CXCL10，CXCL12，IL-10在正常對照和荷瘤小鼠兩組食道組織的表達(dá)沒有顯著差異，而 IL-6，IL-1β，TNF-α， S100A8，Arginase1，IL

5、-17和CXCL1的表達(dá)在荷瘤小鼠顯著上調(diào)，提示這些因子與MDSCs在體內(nèi)外周免疫器官和腫瘤微環(huán)境的浸潤和募集相關(guān)。
　　結(jié)論：（1）通過4-NQO飲水法，可誘發(fā)C57BL/6小鼠產(chǎn)生食管鱗狀細(xì)胞癌的病變，癌變的過程經(jīng)歷了單純性上皮增生——不典型增生——浸潤性癌的經(jīng)典病理變化過程。（2）CD11b+Gr-1+MDSCs細(xì)胞在小鼠食管癌演進(jìn)過程中，在外周血、脾臟和腫瘤組織的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的上調(diào)趨勢，IL-6、IL-1β、TNF-α、S