人羊膜上皮細胞及間充質(zhì)細胞在大鼠受損肝組織中分化成人肝細胞.pdf

1、目的：重癥肝病尚無特效療法，細胞移植治療肝損傷疾病是一種值得探索的新途徑。羊膜上皮和羊膜間充質(zhì)細胞具有干細胞特性，在體外適當?shù)恼T導條件下均可分化為肝細胞，其體內(nèi)是否可以作為肝細胞供體治療肝損傷疾病尚未探明。本研究的目的是尋找人羊膜細胞在大鼠肝損傷原位分化為肝細胞的證據(jù)，為其作為細胞供體臨床治療肝損傷疾病提供實驗依據(jù)。 方法：采用二酶消化法從人羊膜組織中分離hAECs和hAMCs，采用流式細胞術(shù)（FCM）和免疫熒光染色進行表型分析

2、和細胞鑒定。采用腹腔注射D—氨基半乳糖，按400mg/kg建立大鼠肝損傷模型，隨機分為hAECs移植組、hAMCs移植組和對照組，每組20只。造模后24h用微量注射器于肝左、中、右葉3點分別注射L—DMEM懸浮的hAECs或hAMCs懸液50μl（約1×106個細胞），對照組注射等量L—DMEM。于移植后48h、1w、2w、3w或4w處死各實驗組3～4大鼠，取移植部位行常規(guī)病理學檢查和行免疫熒光染色或免疫組化染色以觀察肝組織病理變化、h

3、AECs和hAMCs在受損肝原位的植活與分布及其甲胎蛋白（AFP）、CK18、CK19和白蛋白（Alb）的表達情況。 結(jié)果：①FCM分析結(jié)果顯示，所分離的hAECs幾乎不表達CD44，而hAMCs中則部分表達CD44；免疫熒光染色顯示hAECs只表達CK19，而hAMCs只表達波形蛋白。②與對照組比較，hAECs和hAMCs移植組于移植后48h肝門管區(qū)嗜堿性小細胞增多，肝細胞壞死較輕；移植后7d肝小葉結(jié)構(gòu)較為完整。③免疫熒光染色