自分泌胞外全基質(zhì)修飾鈦種植體表面的研究.pdf

1、背景：自骨整合（osseointegration）理論成為口腔種植學(xué)發(fā)展的主導(dǎo)理論，口腔種植學(xué)得到廣泛的發(fā)展和應(yīng)用。但是，目前種植修復(fù)也存在植入后愈合時(shí)間較長(zhǎng)，在骨質(zhì)、骨量不良的部位失敗率較高等問(wèn)題。種植體-組織界面的反應(yīng)被認(rèn)為是決定牙種植體成功和失敗的重要因素之一，所以學(xué)者們紛紛通過(guò)對(duì)種植材料表面進(jìn)行有效的控制，促進(jìn)骨整合。近年來(lái)在種植體表面粗糙化和表面氧化物活化的基礎(chǔ)上，將生物活性分子復(fù)合在種植體表面的生化改性成為種植體設(shè)計(jì)研究中較

2、為活躍和發(fā)展較快的領(lǐng)域。為了模擬胞外基質(zhì)對(duì)生物行為的調(diào)控功能，通常采用基質(zhì)中的活性成分對(duì)鈦表面進(jìn)行改性，并取得較為肯定的結(jié)果。但這些單一的活性成分與天然基質(zhì)仍有差距。因此為了使鈦種植體的仿生構(gòu)建更接近天然情況，本次研究試想用生物自行分泌的胞外基質(zhì)作為一種新型生物材料，進(jìn)行初步探討。
　　 目的：在體外研究成骨細(xì)胞自身分泌的胞外基質(zhì)（ECM）修飾的鈦表面對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并為進(jìn)一步指導(dǎo)鈦種植體表面的仿生構(gòu)建提供依據(jù)

3、。
　　 方法：取SD乳鼠，采用改良組織塊法培養(yǎng)成骨細(xì)胞。取直徑12mm的鈦棒，加工成厚1 mm純鈦片，消毒后放入24孔培養(yǎng)板中，用DMEM培養(yǎng)液將成骨細(xì)胞濃度調(diào)整為3×105/mL，取1 mL/孔接種于鈦片上，經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融脫去細(xì)胞留下基質(zhì)，即為基質(zhì)化鈦片（Ti/ECM）。取SD大鼠，采用全血貼壁法培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，取傳至第3代的細(xì)胞，用DMEM培養(yǎng)液將其濃度調(diào)整為1×105/mL，取1 mL/孔分別接種于基質(zhì)化

4、鈦片和純鈦片上，分為基質(zhì)化鈦片組（Ti/ECM/BMSCs）、純鈦片組（CpTi/BMSCs）。通過(guò)熒光免疫組化、掃描電鏡的觀察和MTT檢測(cè)、ALP活性檢測(cè)，觀察基質(zhì)化鈦片的表面形貌變化、胞外基質(zhì)形態(tài)和標(biāo)識(shí)成分，并比較兩組鈦片上骨髓基質(zhì)細(xì)胞的早期黏附、鋪展、生長(zhǎng)增殖、分化情況。
　　 結(jié)果：關(guān)于鈦片的基質(zhì)化構(gòu)建，熒光顯微鏡顯示去細(xì)胞后，鈦表面存有胞外基質(zhì)的生物活性成分，其呈現(xiàn)為不規(guī)則絮狀，SEM顯示基質(zhì)化后鈦片表面被一層似膠狀物

5、質(zhì)覆蓋；關(guān)于兩組細(xì)胞行為比較，SEM顯示骨髓基質(zhì)細(xì)胞在基質(zhì)化鈦片表面黏附、鋪展良好，在接種4h時(shí)，Ti/ECM/BMSCs細(xì)胞黏附率與CpTi/BMSCs組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），接種1、3、5、7天后，Ti/ECM組的細(xì)胞增殖與CpTi組之間存在顯著性差異(P<0.05)；接種5天后，Ti/ECM表面的細(xì)胞分化與CpTi的之間存在顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：經(jīng)過(guò)初步基質(zhì)化構(gòu)建，鈦片表面存有多種胞外基質(zhì)的生物