骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)缺氧-復(fù)氧(損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞TrKB-Bcl-2)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：建立星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocyte AS）缺氧／復(fù)氧損傷模型，觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow stromal cells BMSCs）對(duì)缺氧／復(fù)氧后AS凋亡和TrkB/Bcl-2蛋白表達(dá)變化的影響。探討B(tài)MSCs治療腦缺血損傷的可能機(jī)制。
　　 方法：提取SD大鼠的BMSCs和新生SD大鼠的AS原代培養(yǎng)，并傳代、擴(kuò)增、鑒定。采用三氣培養(yǎng)箱，將AS缺氧8h后再恢復(fù)正常培養(yǎng)條件建立AS缺氧／復(fù)氧損傷模型。采用T

2、ranswell共培養(yǎng)板將缺氧8h后的AS與BMSCs共培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(N組)、缺氧／復(fù)氧組(H/R組)、共培養(yǎng)組（C組）。觀察BMSCs對(duì)缺氧／復(fù)氧后AS凋亡和TrkB/Bc1-2蛋白表達(dá)變化的影響。采用Annexin V-FTTC檢測(cè)AS細(xì)胞的凋亡，Western blot檢測(cè)TrkB/Bcl-2蛋白表達(dá)，SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：1．成功分離、純化、

3、擴(kuò)增、鑒定大鼠BMSCs、新生大鼠AS，均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的純度。2．建立星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷模型，并應(yīng)用Transwell共培板將其與BMSCs成功共培養(yǎng)。3．共培養(yǎng)24h后共培養(yǎng)組AS的凋亡率明顯低于缺氧／復(fù)氧組(P＜0.05)。4．缺氧8h后，缺氧／復(fù)氧(H/R)組、共培養(yǎng)(C)組TrkB表達(dá)增多，蛋白24h表達(dá)升高達(dá)峰值，此后雖有所降低但仍維持較高水平，組間兩兩比較，對(duì)照組低于缺氧／復(fù)氧(H/R)組(P＜0.05)，缺氧／復(fù)氧

4、(H/R)組低于共培養(yǎng)組(P＜0.05):Bcl-2蛋白表達(dá)亦明顯上調(diào)，高峰出現(xiàn)于24h，組間兩兩比較，對(duì)照組低于缺氧／復(fù)氧（H/R）組（P＜0.05），缺氧／復(fù)氧（H/R）組低于共培養(yǎng)組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1．缺氧／復(fù)氧后的AS細(xì)胞損害隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加重。2．缺氧／復(fù)氧后的AS細(xì)胞TrkB/Bcl-2通路活性增強(qiáng)。3.BMSCs可能通過調(diào)控缺氧／復(fù)氧損傷AS細(xì)胞TrkB/Bcl-2通路活性來抑制AS凋亡，從而減輕