亞低溫對缺氧-復(fù)氧星形膠質(zhì)細(xì)胞Bcl-2、Bax及GDNF表達(dá)的影響.pdf

1、、目錄縮略詞表1中文摘要2英文摘要5前言Bomoomoo8剛岙8材料和方法101材料lO2方法11結(jié)果19討論24結(jié)論32論文圖片33參考文獻(xiàn)39綜述0000000046攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文題目56臨床培訓(xùn)小結(jié)”57致謝”59論文聲明60論文審閱認(rèn)定書6l徐州醫(yī)學(xué)院碩士論文亞低溫對缺氧／復(fù)氧星形膠質(zhì)細(xì)胞Bcl一2Bax及GDNF表達(dá)的影響中文摘要目的觀察亞低溫干預(yù)下缺氧／復(fù)氧星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Bcl2Bax及GDNF的變化規(guī)律，探

2、討亞低溫對腦缺血再灌注損傷的可能保護(hù)機制。方法利用新生24小時內(nèi)的SD大鼠，取皮層新鮮腦組織，參照McCarthy等的方法加以改進(jìn)進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，AC)原代培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞密度為5x105／crn2，接種到含胎牛血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)。利用倒置顯微鏡觀察AC生長及分化的形態(tài)學(xué)變化。78天后傳代，傳至第3代，細(xì)胞自然純化后，采用神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(gliafibrillaryacidprotein，G

3、FAP)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)鑒定AC，95％以上為陽性細(xì)胞，符合實驗要求。將AC分為正常對照組(C)、缺氧／復(fù)氧常溫組(H／R)、缺氧／復(fù)氧亞低溫組(H／MR)。用三氣培養(yǎng)箱調(diào)節(jié)溫度37“12，以95％N2和5％C02造成細(xì)胞缺氧，待氧分壓降到1％后始記缺氧損傷時間，缺氧8小時后，斷開95％N2，接入95％空氣，將三氣培養(yǎng)箱分別調(diào)節(jié)溫度37℃、32“C培養(yǎng)開始記時復(fù)氧時間。每組設(shè)復(fù)氧4小時、8小時、12小時、24小時、48小時、72小時6個

4、時間點，建立AC缺氧／復(fù)氧模型。MTT比色法測定AC的存活力，作為細(xì)胞損傷指標(biāo)，免疫印跡法半定量檢測GDNF、Bcl2、Bax的變化，Hoechst33342染色法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡情況。采用SPSSl60統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果1體外培養(yǎng)AC及GFAP鑒定結(jié)果：AC傳3代后，細(xì)胞呈星形，胞體較大而扁，突起較多而長，里放射狀。GFAP免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定AC，95％為陽性，胞體呈三角形，胞漿呈綠色，深綠色為強陽性，突起細(xì)，胞膜