miR-1246在EGFL7介導(dǎo)的BGC823侵襲遷移中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、中圖分類號(hào)墅魚UDC610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q5三三密級(jí)公玨miR一1246在EGFL7介導(dǎo)的BGC823侵襲遷移中的作用及其機(jī)制研究ThestudyofthemechanismandroleofmiR1246inEGFL7mediatedinvasionandmigrationofBGC823作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：副指導(dǎo)教師：肖妮基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院劉保安教授王寬松副教授論文答辯日

2、期型生墊：塑答辯委員會(huì)主席中南大學(xué)二0一四年五月miR1246在EGFL7介導(dǎo)的BGC823侵襲遷移中的作用及其機(jī)制研究摘要：背景與目的：侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡的主要原因，有關(guān)其分子機(jī)制的研究一直以來是胃癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。EGFL7是一種分泌型促血管生成因子，在許多腫瘤中都可發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)降低胃癌細(xì)胞BGC823中的EGFL7基因表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲遷移能力下降，并伴有miR1246的表達(dá)上調(diào)，但具體效應(yīng)機(jī)制不清。

3、miR1246是一新發(fā)現(xiàn)的miRNA，目前有關(guān)它的研究較少，關(guān)于它在胃癌中作用的研究尚未見報(bào)道。本研究旨在探討miR一1246對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并通過靶基因預(yù)測網(wǎng)站預(yù)測、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證等方法，探討、驗(yàn)證miR一1246的效應(yīng)分子，以此來說明EGFL7基因低表達(dá)后BGC823細(xì)胞侵襲遷移能力的下降可能與miR1246及其預(yù)測靶基因有關(guān)，為研究miR一1246在胃癌中的作用提供了新思路，也為研究EGFL7在胃癌中作用機(jī)

4、制及其后續(xù)的分子靶向治療提供新視角。方法：(1)用RealtimePCR驗(yàn)證BGC823、BGC823NC(陰性對(duì)照組BGC823穩(wěn)定細(xì)胞系)、BGC823E(EGFL7低表達(dá)的BGC823穩(wěn)定細(xì)胞系)三組細(xì)胞中miR1246表達(dá)情況；(2)Westemblotting和RealtimePCR檢測BGC823、BGC823NC、BGC823E三組細(xì)胞中Ncadherin表達(dá)情況；(3)轉(zhuǎn)染miR1246mimics后胃癌細(xì)胞BGC823

5、的侵襲遷移能力變化及其預(yù)測靶基因Ncadherin的蛋白和mRNA表達(dá)情況；(4)轉(zhuǎn)染miR1246inhibitor后胃癌細(xì)胞BGC823E的侵襲遷移能力變化及其預(yù)測靶基因Ncadherin的蛋白和mRNA表達(dá)情況；(5)將含有與miRNA1246結(jié)合位點(diǎn)的Ncadherin3UTR(野生型)及突變位點(diǎn)(突變型)構(gòu)建至雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒中，與miR1246mimics及NegativeControl共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中，檢測雙熒光素