特發(fā)性肺纖維化患者紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的：通過研究紅細(xì)胞補(bǔ)體受體1(CR1)密度基因多態(tài)性及CR1基因A3650G位點(diǎn)多態(tài)性與特發(fā)性肺纖維化的相關(guān)性并研究CR1的HindⅢ密度相關(guān)基因組多態(tài)性與紅細(xì)胞膜上CR1數(shù)量表達(dá)水平的關(guān)系，探討特發(fā)性肺纖維化患者的遺傳易感因素及發(fā)病機(jī)制。 方法：采用基于人群的病例.對(duì)照研究方法，選取臨床確診為特發(fā)性肺纖維化(IPF)漢族患者64例，其中男性36例，女性28例，年齡42歲～78歲，平均(58.4±7.3)歲，且除外繼發(fā)性肺纖維

2、化、急性感染、腫瘤、栓塞、心衰、控制不良的糖尿病、消化性潰瘍、嚴(yán)重骨質(zhì)疏松、結(jié)核病患者。對(duì)照組：選擇漢族健康體檢人群54例。其中男性32例，女性22例，年齡48歲～67歲，平均年齡(55.8±4.3)歲。且既往無變態(tài)反應(yīng)性疾病病史，近期無感染，無免疫抑制劑應(yīng)用史。采集IPF患者及健康對(duì)照人群外周靜脈EDTA抗凝血，以蛋白酶K消化-苯酚-氯仿有機(jī)溶劑法和離子吸附柱法提取外周血白細(xì)胞DNA，利用限制性內(nèi)切酶HindⅢ，聚合酶鏈反應(yīng).限制性片

3、段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法檢測(cè)IPF患者及健康對(duì)照人群紅細(xì)胞CR1的HindⅢ密度相關(guān)基因組多態(tài)性以及CR1基因A3650G多態(tài)位點(diǎn)的基因型；采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定IPF患者及健康對(duì)照人群CR1在紅細(xì)胞膜上的數(shù)量表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.64例IPF患者與54例健康對(duì)照人群相比，紅細(xì)胞C

4、R1基因HindⅢ-RFLP密度多態(tài)性有顯著不同。其中IPF患者中HH型、HL型和LL型分別有21例(32.8％)、30例(46.9％)和13例(20.3％)；54例健康對(duì)照組分別有39例(72.2％)、14例(25.9％)和1例(1.9％)，兩組間CRl基因型構(gòu)成比差異有顯著性(χ2=15.516，P=0.000＜0.05)。高表達(dá)型(HH)IPF組明顯低于健康對(duì)照組(P=0.022＜0.05)，中表達(dá)型(HL)IPF組明顯高于健康對(duì)

5、照組(P=0.019＜0.05)，而低表達(dá)型(LL)IPF患者組明顯高于健康對(duì)照組(P=0.013＜0.05)。 IPF患者與健康對(duì)照人群CR1基因型優(yōu)勢(shì)比分析：HL+LL基因型優(yōu)勢(shì)比OR=5.32，OR值95％的可信區(qū)間為(2.4660-11.4771)，經(jīng)卡方檢驗(yàn)后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.20，P=0.000＜0.05)。 2.64例IPF患者和54例健康對(duì)照人群相比，攜帶A等位基因的IPF患者有57例(89.1

6、％)、攜帶G等位基因7例(10.9％)；健康對(duì)照人群攜帶A等位基因的人數(shù)為51例(94.4％)、健康對(duì)照人群攜帶G等位基因的人數(shù)為3例(5.6％).CR1基因A3650G位點(diǎn)的等位基因頻率在IPF患者和健康對(duì)照組之間比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理χ2=1.094，P=0.296＞0.05，總體分布無顯著性差異。 3.IPF患者紅細(xì)胞上CR1數(shù)量表達(dá)較健康對(duì)照人群CR1表達(dá)明顯減少，CR1在IPF忌者紅細(xì)胞上的平均熒光強(qiáng)度為13.46±3.

7、86，健康對(duì)照人群CR1在紅細(xì)胞上的平均熒光強(qiáng)度為24.33±3.84，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理t=15.288，p=0.000＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4 IPF患者以及健康對(duì)照人群CR1基因HindⅢ-RFLP高表達(dá)型(HH)的紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平高于中表達(dá)(HL)紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平(t=9.973，P=0.000＜0.05)，中表達(dá)型(HL)的紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平高于低表達(dá)(LL)紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平(t=4.35

8、9，P=0.000＜0.05)，說明紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)由CR1基因HindⅢ-RFLP決定，受先天遺傳因素的影響。 5 IPF患者CR1基因HindⅢ-RFLP高表達(dá)型(HH)的紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平低于健康對(duì)照人群(t=14.297，P=0.000＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中表達(dá)型(HL)紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平低于健康對(duì)照人群(t=12.221，P=0.000＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低表達(dá)型(LL)紅細(xì)胞CRl數(shù)量

9、表達(dá)水平低于健康對(duì)照人群(t=2.534，P=0.026＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明E-CR1同時(shí)受后天因素影響。 結(jié)論： 1.結(jié)合本研究推測(cè)紅細(xì)胞CR1數(shù)量表達(dá)水平既受CR1基因HindⅢ密度相關(guān)基因組多態(tài)性遺傳控制又受后天因素的影響CR1基因HL型和LL型人群可能是特發(fā)性肺纖維化的易感人群，攜帶L等位基因的個(gè)體存在對(duì)特發(fā)性肺纖維化的易感性。 2紅細(xì)胞CR1下降導(dǎo)致循環(huán)免疫復(fù)合物清除能力降低可能是特發(fā)性肺纖