普伐他汀干預(yù)p38 MAPK、IFN-gamma-STAT1、IL-6-STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的和意義]： 本研究旨在觀察普伐他汀在預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)形成過(guò)程中對(duì)p38MAPK、IFN-gamma(γ)/STAT1及IL-6/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響，研究結(jié)果將為普伐他汀干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化提供新的途徑，為防治動(dòng)脈粥樣硬化提供更有臨床價(jià)值的信息。 [實(shí)驗(yàn)方法]： 1.采用含1.25％(wt/wt)膽固醇的飼料喂養(yǎng)8周齡apoE-1-小鼠誘導(dǎo)AS模型，同時(shí)普伐他汀灌

2、胃(80mgkg-1)干預(yù)，8周后，處死小鼠，收集血清，分離主動(dòng)脈，根部用于組織形態(tài)學(xué)分析，胸腹主動(dòng)脈用于mRNA和蛋白分析。 2、采用生化法測(cè)定血清內(nèi)TC和LDL-C變化。 3、主動(dòng)脈根用做石蠟切片，HE染色后，檢測(cè)AS的面積和炎癥反應(yīng)程度。 4、real-timePCR法檢測(cè)胸腹主動(dòng)脈內(nèi)IFN-γ和TNF-α的mRNA水平。 5、采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清內(nèi)IL-6、IFN～-γ、T

3、NF-α和OX-LDL含量，以及胸腹主動(dòng)脈內(nèi)IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量。 6、檢測(cè)胸腹主動(dòng)脈內(nèi)MDA和GSH的含量，檢測(cè)胸腹主動(dòng)脈SOD、GSH-Px、CAT、GST的活性。 7、采用Western-Blot法檢測(cè)胸腹主動(dòng)脈內(nèi)3-nitrotyrosine、iNOS、p38MAPK、p-p38-MAPK、p53、STAT1、pSTAT1、STAT3、pSTAT3、IRF-1、SOCS1蛋白表達(dá)的水平。

4、 [結(jié)果]： 1、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠AS病變的相對(duì)面積(30.84％)顯著高于空白對(duì)照組(4.62％)(P＜0.05)，普伐他汀干預(yù)小鼠AS病變的相對(duì)面積(7.91％)顯著低于動(dòng)脈粥樣硬化小鼠(P＜0.05)。 2、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血清內(nèi)TC(26.59±7.25mmol/L)和LDL-C(21.76±6.29mmol/L)的含量顯著升高(P＜0.05)，普伐他汀干預(yù)后血清內(nèi)TC(21.62±12.78mmol/L)和LD

5、L-C(17.45±11.08mmol/L)的含量與動(dòng)脈粥樣硬化小鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血清內(nèi)氧化產(chǎn)物ox-LDL和炎癥因子IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量顯著升高(P＜0.01)，普伐他汀可顯著逐漸減少小鼠血清內(nèi)ox-LDL(P＜0.05)和IL-6(P＜0.01)、IFN-γ(P＜0.01)、TNF-α(P＜0.01)的含量。 4、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈AS病變內(nèi)IFN-γ和TNF-α的

6、mRNA水平顯著升高(P＜0.05)，普伐他汀干預(yù)后可顯著降低主動(dòng)脈內(nèi)IFN-γ和TNFα的mRNA水平(P＜0.05)。 5、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈內(nèi)IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量顯著升高(P＜0.01)，普伐他汀可顯著降低主動(dòng)脈內(nèi)IL-6(P＜0.01)、IFN-γ(P＜0.01)、TNF-α(P＜0.05)的含量。 6、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈內(nèi)MDA的含量顯著增加(P＜0.01)，GSH含量和SOD、CAT

7、、GST、GSH-Px的活性顯著降低(P＜0.01)，普伐他汀干預(yù)后可顯著降低主動(dòng)脈內(nèi)MDA的含量(P＜0.01)，顯著增加GSH含量(P＜0.01)和SOD(P＜0.01)、CAT(P＜0.01)、GST(P＜0.01)、GSH-Px(P＜0.05)的活性。 6、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈內(nèi)3-nitrotyrosine、iNOS的表達(dá)顯著增加，普伐他汀干預(yù)后可顯著減少主動(dòng)脈內(nèi)3-nitrotyrosine、iNOS的表達(dá)。

8、 7、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的p38MAPK信號(hào)通路的活性因子p-p38MAPK及該通路的下游因子p53的表達(dá)顯著增加，普伐他汀干預(yù)后可顯著降低主動(dòng)脈內(nèi)p-p38MAPK及p53的表達(dá)。 8、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈內(nèi)IFN-γ/STAT1和IL-6/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路的活性因子pSTAT1和pSTAT3的表達(dá)增加，普伐他汀干預(yù)后顯著降低主動(dòng)脈內(nèi)pSTAT1和pSTAT3的表達(dá)。 9、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈內(nèi)I

9、FN-γ/STAT1和IL-6/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路的抑制因子SOCS1的表達(dá)顯著降低，普伐他汀干預(yù)后顯著增強(qiáng)主動(dòng)脈SOCS1的表達(dá)。 [結(jié)論]： 1、普伐他汀可預(yù)防高膽固醇飲食誘導(dǎo)的apoE-1-小鼠AS。 2、AS時(shí)血清膽固醇含量增高，普伐他汀沒(méi)有降低apoE-1-小鼠血清膽固醇的作用，普伐他汀預(yù)防apoE-1-小鼠AS的效應(yīng)不依賴其降膽固醇作用。 3、AS時(shí)氧化還原系統(tǒng)失平衡和炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，普伐他