超聲輔助提取東北黑蜂蜂膠活性成分及其指紋圖譜研究.pdf

1、蜂膠是蜜蜂從不同的植物收集的一種樹脂蜂巢產(chǎn)品，其主要的活性成分有黃酮類、萜烯、酚酸及其衍生物類等，它具有抑菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和降血糖等生物活性。東北黑蜂具有很強的抗凍性，零下兒十度可以安全越冬，但是關(guān)于黑蜂蜂膠有效成分及其活性功能的研究工作較少。本文以抗氧化活性和抑菌活性為指標，進行了東北黑蜂蜂膠活性物質(zhì)的極性篩選;研究了活性物質(zhì)的超聲輔助提取技術(shù)及其溶出動力學(xué)模型;采用掃描電鏡、紫外、紅外、GC-MS和LC-MS等分析方法對提取物進

2、行了微觀結(jié)構(gòu)表征和指紋圖譜分析。
　　主要研究工作及其結(jié)論如下:
　　(1)東北黑蜂蜂膠抗氧化和抑菌活性物質(zhì)的極性篩選:采用甲醇、乙醇、水、乙酸乙酯、苯和三氯甲烷等不同極性的溶劑萃取東北黑蜂蜂膠中的活性物質(zhì)，研究了其活性成分存在的極性范圍。研究結(jié)果表明，東北黑蜂蜂膠不同溶劑的萃取物均具有一定的抗氧化活性，其中甲醇提取物(ME)和乙醇提取物(EE)的抗氧化活性更最強;不同極性的提取物對除大腸桿菌以外的其它試驗菌（金黃色葡萄球菌

3、、枯草芽孢桿菌、李斯特菌）均具有抑制生長的作用，且甲醇和乙醇提取物的抑菌性最強。通過上述生物活性的測定，確定乙醇為東北黑蜂蜂膠活性成分提取的最佳溶劑。
　　(2)東北黑蜂蜂膠活性組分的單頻逆流超聲輔助提取:以黃酮和三萜總提取率為指標，研究了乙醇濃度、提取溫度、超聲時間、占空比和液料比對黃酮和三萜總提取率的影響。結(jié)果表明，液料比、提取溫度、提取時間和占空比四個因素對目標提取物的提取效果影響較為顯著。根據(jù)單因素試驗方差分析結(jié)果，采用響

4、應(yīng)面實驗設(shè)計與分析方法得到了東北黑蜂蜂膠主要活性成分最優(yōu)提取條件為:乙醇濃度80％，液料比32∶1 mL/g、提取溫度53℃、提取時間16 min、占空比10 s/5 s，在此條件下黃酮和三萜的提取率為61.11％，比不加超聲的黃酮和三萜提取率提高了24％。
　　(3)東北黑蜂蜂膠活性組分在超聲場下溶出動力學(xué)模型:對東北黑蜂蜂膠中黃酮和三萜的單頻逆流脈沖超聲輔助提取過程用二級動力學(xué)模型進行擬合發(fā)現(xiàn)，擬合度高，可以用于模擬、預(yù)測蜂膠

5、中黃酮和三萜的逆流脈沖超聲輔助同時提取過程與提取效果。
　　(4)東北黑蜂蜂膠醇提物指紋圖譜的分析:通過對東北黑蜂蜂膠提取物進行電鏡、紅外和紫外光譜表征，確定了東北黑蜂蜂膠提取物的特征峰。東北黑峰蜂膠乙醇提取物在紫外區(qū)有2個吸收峰，在292 nm下有一個最強吸收峰，在356nm有一個很弱的吸收峰，推斷可能是異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物。蜂膠提取物的紅外光譜圖上有15個特征峰，分別推斷為烷烴類化合物、萜烯類化合物、黃酮類化合