糖尿病大鼠缺血再灌注腦組織MMP-9、RECK與VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：建立糖尿病合并急性腦缺血再灌注大鼠模型；觀察缺血腦組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、RECK及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)特點(diǎn)；研究,MMP-9、RECK及VEGF的相關(guān)性；探討它們在糖尿病缺血再灌注腦組織損傷中的作用。 方法 (1)采用高脂高糖飲食加腹腔注射小劑量鏈脲霉素法建立實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病模型，選擇成模者進(jìn)一步采用線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。120只雄性Wistar大鼠被隨機(jī)分為正常對照

2、組(6只)、假手術(shù)組(6只)、單純急性腦缺血再灌注組(CI組，54只)、糖尿病合并急性腦缺血再灌注組(DM+CI組，54只)；其中CI組和DM+CI組各分成缺血再灌注后1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d共7個亞組； (2)采用Longa 5分制評分標(biāo)準(zhǔn)對各組腦缺血再灌注后大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分； (3)采用TTC染色法觀察并標(biāo)記梗死區(qū)域；利用HE染色和免疫組織化學(xué)技術(shù)在光鏡下觀察缺血腦組織病理變化特點(diǎn)；觀察并分類

3、計(jì)數(shù)腦組織缺血中心區(qū)和半暗帶區(qū)MMP-9、RECK及VEGF蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)； (4)各項(xiàng)計(jì)數(shù)指標(biāo)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(（x）±s)表示，應(yīng)用SAS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析、q檢驗(yàn)和直線相關(guān)分析。 結(jié)果： (1)神經(jīng)功能評定結(jié)果 CI組和DM+CI組大鼠麻醉清醒后均出現(xiàn)明顯的右側(cè)眼裂變小、眼球下陷等Horner征表現(xiàn)；CI組共有46只大鼠出現(xiàn)左側(cè)前肢屈曲，向左側(cè)轉(zhuǎn)圈或向左側(cè)傾倒，神經(jīng)功能評分為1.54±0.71

4、分；DM+CI組共有36只大鼠出現(xiàn)上述體征，神經(jīng)功能評分為2.35±0.55分，兩組相比有顯著性差異(P<0.05)。假手術(shù)組動物也出現(xiàn)明顯的Horner征表現(xiàn)，但無其他神經(jīng)功能缺損體征。 (2)TTC染色結(jié)果非梗死區(qū)腦組織被染成紅色；梗死區(qū)呈現(xiàn)蒼白色，與大腦中動脈供血分布區(qū)域一致；相同缺血再灌注時(shí)相點(diǎn)DM+CI組蒼白區(qū)面積較CI組大。 (3)MMP-9表達(dá)結(jié)果假手術(shù)組和正常對照組大鼠腦組織中MMP-9陽性表達(dá)較少、散在

5、分布；CI組和DM+CI組腦組織中MMP-9的陽性表達(dá)主要分布于梗死中心和半暗帶區(qū)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞及中性粒細(xì)胞等處。CI組和DM+CI組大鼠腦組織中MMP-9表達(dá)均較正常對照組明顯增加(P<0.05)，其中DM+CI組較CI組明顯增加(P<0.05)；DM+CI組MMP-9于再灌注3h丌始升高，24h達(dá)到高峰，3d后逐漸下降。 (4)RECK蛋白表達(dá)結(jié)果假手術(shù)組和正常對照組大鼠腦組織中可見RECK蛋白陽性細(xì)胞主

6、要表達(dá)在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞等胞漿內(nèi)；CI組和DM+CI組陽性表達(dá)散在分布于梗死周邊區(qū)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等處。CI組和DM+CI組大鼠腦組織中RECK蛋白表達(dá)均較J下常對照組明顯減少(P<0.01)，與CI組相比，DM+CI組陽性表達(dá)明顯降低(P<0.05)。DM+CI組RECK蛋白于再灌注3h表達(dá)開始降低，至24h達(dá)到最低，隨后逐漸增加。 (5)VEGF蛋白表達(dá)結(jié)果假手術(shù)組和正常對照組鼠腦中僅見微量VEGF表達(dá)

7、；DM+CI組和CI組腦組織VEGF陽性表達(dá)主要分布于梗死周邊區(qū)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮、脈絡(luò)叢等處。CI組和DM+CI組大鼠腦組織中VEGF表達(dá)均較正常對照組明顯增加(P<0.01)，與CI組相比，DM+CI組陽性表達(dá)明顯降低(P<0.01)。DM+CI組VEGF表達(dá)于再灌注1h開始升高，至6h達(dá)到高峰，隨后逐漸降低。 (6)直線相關(guān)分析表明，DM+CI組和CI組大鼠腦組織中MMP-9與RECK蛋白均呈直線負(fù)相關(guān)；DM+

8、CI組和CI組大鼠腦組織中MMP-9與VEGF表達(dá)呈直線相關(guān)，其中DM+CI組于再灌注6～24h時(shí)段MMP-9與VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論 (1)高血糖條件下缺血再灌注后腦組織梗死面積較單純腦缺血再灌注后顯著增大，缺血后神經(jīng)功能缺損癥狀較后者顯著加重。 (2)糖尿病大鼠腦缺血后表達(dá)MMP-9、RECK和VEGF蛋白的細(xì)胞種類與單純腦缺血相同，提示這幾種細(xì)胞可能通過參與對MMP-9、RECK和VEGF蛋白的分泌調(diào)

9、節(jié)而影響腦缺血后組織病理生理變化的過程。 (3)高血糖條件下，缺血再灌注后腦組織MMP-9表達(dá)較單純腦缺血再灌注后表達(dá)明顯升高，RECK和VEGF蛋白表達(dá)則明顯減低，提示MMP-9參與調(diào)節(jié)RECK和VEGF蛋白表達(dá)變化過程。 (4)MMP-9、RECK及VEGF表達(dá)在缺血區(qū)空間分布上的一致性，和隨時(shí)相變化的線性相關(guān)關(guān)系，提示：糖代謝異常引起MMP-9表達(dá)升高，RECK、VEGF蛋白表達(dá)較單純腩缺血后降低，而高表達(dá)的刪P-