LPS與CD59單克隆抗體聯(lián)合激活補(bǔ)體抗腫瘤效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：國(guó)外報(bào)道在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞中如腸道、卵巢、前列腺等已發(fā)現(xiàn)有CD59分子的過(guò)表達(dá)，并證實(shí)其與腫瘤的失控性生長(zhǎng)、惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。本研究利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立高效真核表達(dá)系統(tǒng)，觀測(cè)人卵巢癌A2780細(xì)胞表面野生型CD59與突變型CD59分子的表達(dá)情況及其抗補(bǔ)體活性變化，推斷W40位點(diǎn)的生物學(xué)活性：并探討突變型CD59基因轉(zhuǎn)染與LPS聯(lián)合、以及LPS與CD59單克隆抗體聯(lián)合激活補(bǔ)體的抗腫瘤效應(yīng)。 方法：利用大腸桿菌JM109擴(kuò)增突變

2、型CD59質(zhì)粒和野生型CD59質(zhì)粒，并用陽(yáng)離子脂質(zhì)體(Lipfectine)將兩種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入人卵巢癌A2780細(xì)胞，G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞克隆。并用RT-PCR、酶免疫染色、熒光免疫染色、Western-blot、流式細(xì)胞術(shù)在mRNA水平和蛋白水平鑒定CD59突變基因和野生型基因的轉(zhuǎn)染成功。通過(guò)MTT法計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率及LDH乳酸脫氫酶釋放法觀察突變型CD59和野生型CD59抗補(bǔ)體能力的改變，以及CD59mAb與LPS聯(lián)合作

3、用激活補(bǔ)體抗腫瘤效應(yīng)。 結(jié)果：通過(guò)RT-PCR、酶免疫染色、熒光免疫染色、Western-blot、流式細(xì)胞術(shù)鑒定說(shuō)明建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和突變型CD59的A2780細(xì)胞。MTT結(jié)果顯示與野生型CD59相比，突變型CD59失去對(duì)補(bǔ)體的抑制功能，與對(duì)照組未轉(zhuǎn)染的A2780細(xì)胞無(wú)顯著差別；在5 mg/L LPS單獨(dú)作用30 min后，MTT檢測(cè)對(duì)轉(zhuǎn)染野生型CD59，突變型CD59及未轉(zhuǎn)染A2780細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制率分別為(26.9

4、±2.95)％、(36.3±4.87)％、(29.6±3.16)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LDH釋放試驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)突變型CD59轉(zhuǎn)染的A2780細(xì)胞，其補(bǔ)體殺傷率為65.13±9.77明顯高于野生型CD59轉(zhuǎn)染的A2780細(xì)胞，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；與CD59mAb、LPS的單獨(dú)作用組相比，兩者聯(lián)合作用在5mg/L和10mg/L時(shí)，補(bǔ)體的細(xì)胞殺傷率均明顯高于單獨(dú)作用組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 結(jié)論：CD59的