Lumican對(duì)胃腺癌腺細(xì)胞生物學(xué)特性影響及臨床意義.pdf

1、腫瘤微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個(gè)階段中都起著至關(guān)重要的作用。其中細(xì)胞外基質(zhì)蛋白是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，在腫瘤中常常發(fā)現(xiàn)基質(zhì)蛋白有異常表達(dá)，其有助于腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，近年來(lái)研究顯示，Lumican的表達(dá)與許多惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān)，但其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的確切作用還不明確。因此我們探討了SLRP家族成員Lumican在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，從而進(jìn)一步來(lái)理解Lumican與人類腫瘤的關(guān)系。應(yīng)用RT-PCR、熒光定量PCR、免疫

2、印跡及免疫組織化學(xué)技術(shù)，在mRNA及蛋白水平檢測(cè)了Lumican在胃腺癌組織中的表達(dá)情況；應(yīng)用慢病毒載體系統(tǒng)建立了Lumican過(guò)表達(dá)和特異性干擾細(xì)胞株，利用CCK-8實(shí)驗(yàn)，平板克隆及裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)，分析了過(guò)表達(dá)或干擾Lumican表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；Transwell及Matrigel膠穿實(shí)驗(yàn)，分析了其對(duì)胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了Lumican表達(dá)上調(diào)或下調(diào)時(shí)胃腺癌細(xì)胞失巢凋亡率的改變，及Lumican上調(diào)

3、時(shí)胃腺癌細(xì)胞周期的改變；免疫印跡技術(shù)和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)了smad2、samd3及samd4的表達(dá)和活化。同時(shí)我們還構(gòu)建了Lumcian重組蛋白pQE30-HLumican（分子量約40kDa）原核表達(dá)載體系統(tǒng)及V152-HLumican(分子量約55kDa)真核表達(dá)載體系統(tǒng)，利用CCK-8實(shí)驗(yàn)，分析了兩種重組蛋白對(duì)胃腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)，分析了兩種重組蛋白對(duì)胃腺癌細(xì)胞遷移能力的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了V152-H

4、Lumican重組蛋白對(duì)胃腺癌細(xì)胞失巢凋亡的影響；軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察了其對(duì)胃腺癌細(xì)胞非錨定生長(zhǎng)的影響；裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)觀察了其對(duì)胃腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)的影響。
　　研究結(jié)果表明：胃腺癌組織中Lumican mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁正常粘膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。胃腺癌組織中Lumcian主要以其分子量為55kDa大小的糖蛋白形式存在，40kDa大小的核心蛋白（core protein）也有少量表達(dá)。免疫組化結(jié)果

5、顯示Lumican蛋白在胃腺癌組織的表達(dá)率顯著高于癌旁正常粘膜（91.67%比7.5%，P<0.01），其表達(dá)水平與胃腺癌患者的性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位、Laren分型、是否為印戒細(xì)胞癌、脈管侵犯、癌栓無(wú)明顯相關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而與胃腺癌的浸潤(rùn)深度（P<0.01）、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P<0.01）、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P<0.05）、TNM分期（P<0.01）、腫瘤大?。≒<0.05）和是否為早期胃腺癌（P<0.01）密切相

6、關(guān)。Kaplan-Meier生存統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，Lumican表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性、陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性患者的總體生存率分別為:48.17%、53.56%、68.48%和89.48%，隨著其表達(dá)增強(qiáng)，生存率逐漸減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Lumican過(guò)表達(dá)能夠顯著增強(qiáng)胃腺癌細(xì)胞內(nèi)核心蛋白的表達(dá)，而其糖基化蛋白增強(qiáng)不明顯；Lumican表達(dá)受干擾后，核心蛋白表達(dá)明顯下降，而其糖基化蛋白下降不明顯。Lumican過(guò)表達(dá)能夠抑制胃腺癌細(xì)胞在體

7、內(nèi)外的生長(zhǎng)，抑制胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲，增加失巢凋亡率，同時(shí)Lumican基因過(guò)表達(dá)能夠減緩細(xì)胞周期進(jìn)展，一定程度引起G1期的阻滯。Lumican表達(dá)受干擾后，胃腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)得到促進(jìn)，遷移、侵襲和抗失巢凋亡能力增強(qiáng)。Lumcian可能通過(guò)抑制smad4的表達(dá)，及smad2和smad3的活化來(lái)調(diào)控胃腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和抗失巢凋亡。pQE30-HLumican重組蛋白可抑制胃腺癌細(xì)胞的增殖及遷移。V152-HLumican重組蛋白可促進(jìn)