辛伐他汀對(duì)多柔比星損傷乳鼠心肌細(xì)胞鈣調(diào)蛋白及凋亡的影響.pdf

1、目的:通過(guò)辛伐他汀(SIM)對(duì)多柔比星(DOX)損傷乳鼠心肌細(xì)胞的干預(yù),觀察SIM對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?用酶消化及差速貼壁法分離、純化、培養(yǎng)SD乳鼠原代心肌細(xì)胞,72小時(shí)后用終濃度為1μmol/L的DOX作用24小時(shí)建立心肌細(xì)胞損傷模型。(2)實(shí)驗(yàn)分組:培養(yǎng)72小時(shí)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為五組:正常對(duì)照組(C組)、DOX損傷組(D組)、1μmol/LSIM干預(yù)組(A1組)、10μm

2、ol/LSIM干預(yù)組(A2組)、20μmol/LSIM干預(yù)組(h3組)。(3)檢測(cè)指標(biāo):①倒置相差顯微鏡觀察心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率;②四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率;③AnnexinV-FITC流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率;④熒光染料Fluo-3/AM檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度;⑤Westerblot檢測(cè)心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA2a)和鈣釋放通道(RyR2)蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:①心肌細(xì)胞搏動(dòng)

3、頻率:D、A1、A2、A3組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率分別為(35.21±10.17、57.32±6.96、65.16±6.84、70.53±6.20)次/分,與C組(87.74±8.25)次/分相比,搏動(dòng)頻率顯著減慢,均P＜0.05;與D組相比,A1、A2、A3組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率顯著增快,且呈濃度依賴性,均P＜0.05。②心肌細(xì)胞存活率:D、A1、A2、A3組心肌細(xì)胞存活率分別為(50.54±3.40)%、(58.75±1.64)%、(72.1

4、1±1.77)%、(77.34±4.70)%,與C組(100%)相比,存活率顯著下降,均P＜0.05;與D組相比,A1、A2、A3組心肌細(xì)胞存活率顯著升高,且呈濃度依賴性,均P＜0.05。③凋亡率:D、A1、A2、A3組心肌細(xì)胞凋亡率分別為(47.13±2.09)%、(36.64±3.23)%、(26.19±2.49)%、(24.93±2.96)%,與C組(3.02±1.65)%相比,凋亡率顯著升高,均P＜0.05;與D組相比,A1、A

5、2、A3組心肌細(xì)胞凋亡率顯著降低,且呈濃度依賴性,均P＜0.05。④心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度:D、A1、A2、A3組心肌細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度分別為(51.64±3.37)、(33.10±2.57)、(23.37±2.06)、(22.26±1.00),與C組(8.33±0.73)相比,鈣熒光強(qiáng)度顯著升高,均P＜0.05;與D組相比,A1、A2、A3組心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣熒光強(qiáng)度顯著降低,均P＜0.05;A1組與A2、A3組之間有差異顯著性(P＜0.

6、05),而A2組和A3組之間沒(méi)有差異顯著性(P＜0.05)。⑤鈣調(diào)蛋白的蛋白表達(dá):D、A1、A2、A3組的SERCA2a蛋白表達(dá)分別為(0.29±0.09)、(0.38±0.06)、(0.46±0.07)、(0.45±0.03),與C組(0.64±0.05)相比,表達(dá)顯著下降,均P＜0.05;D、A1、A2、A3組的RyR2蛋白表達(dá)分別為(0.19±0.06)、(0.28±0.05)、(0.32±0.07)、(0.41±0.09),與C

7、組(0.67+0.05)相比,表達(dá)顯著下降,均P＜0.05;與D組相比,A1、A2、A3組SERCA2a和RyR2蛋白表達(dá)顯著上升(均P＜0.05);A2組和A3組之間SERCA2a蛋白表達(dá)沒(méi)有差異顯著性(P＞0.05),而RyR2蛋白表達(dá)有顯著性差異(P＜0.05)。⑥Ca2+濃度與凋亡率的直線相關(guān)性:心肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度與凋亡率呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為R=0.95(P＜0.001)。⑦鈣調(diào)蛋白的蛋白表達(dá)與Ca2+濃度的直線相關(guān)性:心

8、肌細(xì)胞內(nèi)SERCA2a、RyR2蛋白表達(dá)與細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為R=-0.94和-0.86(均P＜0.001)。⑧鈣調(diào)蛋白的蛋白表達(dá)與凋亡率的直線相關(guān)性:心肌細(xì)胞SERCA2a、RyR2蛋白表達(dá)與凋亡率呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為R=-0.95和-0.93(均P＜0.001)。
　　 結(jié)論:SIM能夠顯著減少DOX誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,提高心肌細(xì)胞存活率。其可能機(jī)制在于促進(jìn)鈣調(diào)蛋白SERCA2a和RyR2表達(dá)的增加