臍帶間充質(zhì)干細胞聯(lián)合γ-氨基丁酸對1型糖尿病患者外周血單個核細胞的免疫調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的:通過將不同濃度的人臍帶間充質(zhì)干細胞(hUCMSCs)以及聯(lián)合γ-氨基丁酸(GABA)與1型糖尿病患者外周血單個核細胞(PBMC)共同培養(yǎng)，研究其對PBMC免疫應答反應的影響，并探討其作用機制。
　　 方法:建立不同濃度hUCMSCs以及聯(lián)合GABA與1型糖尿病患者PBMC的共培養(yǎng)體系。以hUCMSCs為刺激細胞，GABA為刺激物，以1型糖尿病患者PBMC為反應細胞，按照hUCMSCs的濃度不同，分為6組。對照組:1×105

2、PBMC單獨培養(yǎng);低濃度組:1×104hUCMSC與1×105PBMC共培養(yǎng);中濃度組:1×105hUCMSC與1×105 PBMC共培養(yǎng);高濃度組1×106hUCMSC與1×105 PBMC共培養(yǎng);聯(lián)合組:1×105hUCMSC聯(lián)合GABA（100μmmol/L）與1×105PBMC共培養(yǎng)。甘露醇組:1×105hUCMSC（中濃度）聯(lián)合甘露醇(100μ mmol/L)與1×105PBMC共培養(yǎng)，以上混合反應體系培養(yǎng)72h后，流式細胞術

3、檢測CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴細胞的數(shù)量及比例，取各反應體系細胞培養(yǎng)上清，ELISA法檢測IL-2，IL-10，AGEs水平。
　　 結果:流式細胞術檢測結果顯示，將不同濃度的hUCMSCs與T1DM患者PBMC共培養(yǎng)后，各反應體系中CD4+T細胞及CD4+/CD8+T細胞比例均明顯下降，而CD8+T、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例顯著上升(P＜0.05)，且呈劑量依賴性。ELISA檢測結果表明，應用hUC

4、MSCs后，各反應體系細胞培養(yǎng)上清中IL-2水平明顯下降，而IL-10明顯上升(P＜0.05)，且呈劑量依賴性，AGEs水平明顯下降，且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。中濃度的hUCMSCs與GABA聯(lián)合后，與單純高濃度hUCMSCs組相比，CD4+T細胞及CD4+/CD8+T細胞比例均明顯下降，而CD8+T、 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例顯著上升(P＜0.05)，細胞培養(yǎng)上清中IL-2水平明顯下降，而IL-10明顯上升(P＜0.0