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1、RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)節(jié)三RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)節(jié)中文摘要目的建立一種理想的體外共培養(yǎng)胚胎著床模型,研究不同濃度的雌二醇(E2)、孕酮(P4)和肝素結(jié)合表皮生長因子(HB—EGF)的刺激對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素p3及其配體骨橋蛋白表達(dá)的影響,以及對共培養(yǎng)模型粘附和鋪展能力的影響,初步探討該模型在胚胎粘附一植入方面的多因素調(diào)節(jié)。方法1、建立RL95
2、2BeWo共培養(yǎng)體外著床模型將人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株RL952制成單層細(xì)胞用于模擬子宮內(nèi)膜上皮,通過無血清培養(yǎng)和低吸附培養(yǎng)皿將人絨毛膜癌細(xì)胞株BeWo制成球狀體用于模擬胚胎,將兩者共培養(yǎng)模擬胚胎著床過程,觀察形態(tài)并計(jì)算球狀體粘附率(本實(shí)驗(yàn)以在澳大利亞亨利王子研究所PHI培訓(xùn)期間所做的球狀體形態(tài)和粘附率作為對照)。2、多因素調(diào)節(jié)RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型粘附一植入功能:(1)粘附因子整合素133及其配體OPN檢測通過間接免疫熒光技術(shù)
3、檢測RL952單層細(xì)胞、BeWo單層細(xì)胞和BeWo球狀體整合素p3及OPN的定位表達(dá);用不同濃度的E2、P4、E2P4及HBEGF處理RL952細(xì)胞,通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)比較各組整合素p3及OPN的mRNA表達(dá)水平。(2)粘附實(shí)驗(yàn)和鋪展實(shí)驗(yàn)用不同濃度的E2、P4、E2P4及HBEGF處理RL952細(xì)胞后與BeWo球狀體共培養(yǎng),比較各組球狀體粘附率;用高濃度E2、P4及HBEGF分別處理RL952細(xì)胞后與BeWo球狀體共培養(yǎng),第1h和第
4、24h時(shí)拍照并測量球狀體的直徑,比較各組球狀體鋪展倍數(shù)。結(jié)果1、建立RL952BeWo體外共培養(yǎng)模型,本實(shí)驗(yàn)組改良方法制備的BeWo球狀體與PHI在形態(tài)和粘附率上無明顯差異(PO05)。2、整合素p3和OPN在RL952單層細(xì)胞、BeWo單層細(xì)胞和BeWo球狀體的細(xì)胞質(zhì)和膜表面表達(dá)。3、E對RL952細(xì)胞的整合素p3和OPNmRNA的表達(dá)無明顯影響(PO05);高濃度RL95—2BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)
5、節(jié)三Abstractobjeetive:ThisstudyaimedtoestablishalleffectiveinvitroCOculturemodelofembryOimplantation,andpreliminarilydiscussedtheadhesiveandembedfunctionofthismode1bydetectingtheexpressionofintegrinl33anditsligindosteopont
6、ininendometrialepitheliumcells,aswellasspheroidsadhesionandexpansionindexesundertheregulationofestradiol(E2),progesterone(P4)andheparinbindingepidermalgrowthfactor(HBEGF)Methods:1ToestablishaninvitroCO—culturemodelofembr
7、yoimplantation:endometrialepithelialcarcinomacellsRL952monolayerswereusedtomimicEndometrialepithelium,choriocarcinomaBeWocellswereformedofspheroidstomimicembryosbythewaysofserum—freeculturingandlowadsorptionpetridish,RL9
8、52monolayerandBeWospheroidswereCO—culturedtoimitateembryoimplantationprocessWeobservedthemorphologyandcalculatedadhesionrateofBeWospheroids,comparedthesameindexeswitllthetrialsinthetrainingofAustraliaPrinceHenry’sInstitu
9、te(PHI)2ToinvestigatemultielementregulationoftheadhesiveandembedrunionofRL952BeWoinvitrococulturemodel:(1)Detectingintegrinl33anditsligindOPNrelatedtoembryoadhesion:Thelocalizationofintegrinl33andOPNinRL952monolayerBeWom
10、onolayerandBeWospheroidsweredetectedbyimmunofluorescenceRL952cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofE2、P4、E2P4andHB—EGFthemRNAexpressionsofintegrinl33andOPNwereanalyzedbyrealtimePCR(2)BeWospheroidsattachmentassayan
11、doutgrowthassayRL952monolayerweretreatedwithdifferentconcentrationsofE2、P4、E2P4andHBEGFandCO—culturedwithBeWospheroids,comparedadhesionrateofeverygroupRL952monolayerweretreatedwimllighconcentrationsofE2、P4、E2P4andHBEGFan
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