基于DNA甲基化探討益氣養(yǎng)陰活血法阻斷大血管病變KKay小鼠高血糖“代謝記憶”效應(yīng)的表觀遺傳學(xué)機(jī)制.pdf

1、目的：本研究以氧化應(yīng)激為切入點(diǎn)，建立KKay小鼠高血糖“代謝記憶”模型，從表觀遺傳學(xué)DNA甲基化角度探討參芪復(fù)方阻斷糖尿病大血管病變高血糖“代謝記憶”的機(jī)制，為中藥防治糖尿病大血管病變提供新的作用靶點(diǎn)。
　　方法：273只7-8周齡雄性自發(fā)性2型糖尿病KKAy老鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)將其分成空白組、模型組、參芪復(fù)方高劑量組、參芪復(fù)方中劑量組、參芪復(fù)方低劑量組、二甲雙胍組等6組。其中，空白組給予普通飼料，模型組、參芪復(fù)方高劑量組

2、、參芪復(fù)方中劑量組、參芪復(fù)方低劑量組、二甲雙胍組KKAy小鼠給予高脂飼料，連續(xù)8周造模，成功造成糖尿病大血管病變代謝記憶模型后，模型組給予10ml/kg.d/只生理鹽水灌服，參芪復(fù)方高劑量組給予28.8g/kg.d/只參芪復(fù)方浸膏灌服，參芪復(fù)方中劑量組給予14.4 g/kg.d/只參芪復(fù)方浸膏灌服，參芪復(fù)方低劑量組給予7.2 g/kg.d/只參芪復(fù)方浸膏灌服，二甲雙胍組給予0.167g/kg.d/只二甲雙胍灌服。實(shí)驗(yàn)期間觀察KKAy小鼠

3、的一般狀況，監(jiān)測空腹血糖變化。分別在藥物干預(yù)的0周、3周、6周、9周4個時間段，每組隨機(jī)抽取8-10只KKAy小鼠，檢測血脂、胰島素、血清3-硝基酪氨酸（3-NT）、8血清異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）、血清氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），從組織水平檢測主動脈血管細(xì)胞凋亡情況、HE染色對胸主動脈進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，運(yùn)用免疫組化檢測腫瘤壞死因子（TNF-α）、Toll樣受體4（TLR-4）、細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）水平、雷帕

4、霉素靶蛋白(mTOR)，借助DNA甲基化技術(shù)獲得被甲基化修飾的差異基因，運(yùn)用GO富集和pathway分析，解釋其生物學(xué)意義。
　　結(jié)果：參芪復(fù)方中中組和西藥組的一般狀況、血糖、血脂、氧化應(yīng)激指標(biāo)、HE病理染色、免疫組化、細(xì)胞凋亡等方面較模型組降低，效果優(yōu)于中高組和中低組。中中組與模型組甲基化差異基因，經(jīng)GO注釋、Pathway分析，主要涉及到Pik3cd、Igf-1、Tsc2、Mtor、Rictor、Rps6ka2、Ulk2、Tl

5、r4、Tnf、Nrf2等基因甲基化。
　　結(jié)論：參芪復(fù)方可以改善糖尿病大血管病變KKAy小鼠的一般狀況，改善多飲、多食，減輕肥胖，平穩(wěn)控制血糖，改善脂代謝紊亂，改善主動脈病理形態(tài)學(xué)改變，尤以中中組作用顯著；Pik3cd、Igf-1、Tsc2、Mtor、Rictor、Rps6ka2、Ulk2等基因的甲基化，選擇性抑制了IGF-PI3K-Akt-TSC2-mTOR信號通路是參芪復(fù)方阻斷高血糖不良“代謝記憶”效應(yīng)，防治糖尿病大血管病變的