電針對(duì)ApoE---小鼠LDLR和PPARγ表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]:
　　觀察針刺干預(yù)ApoE-/-小鼠后的主動(dòng)脈竇斑塊的形態(tài)和斑塊部位LDLR、PPARγ蛋白的表達(dá)變化、肝臟形態(tài)和肝臟細(xì)胞LDLR蛋白的表達(dá)變化以及各組小鼠間血漿氧化低密度脂蛋白和載脂蛋白B含量的差異，探討針刺改善ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病理因素的影響機(jī)制。
　　[方法]:
　　實(shí)驗(yàn)一:將6周齡38只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分成兩組，高脂高膽固醇飲食組（HF組）34只，給予含21％脂肪、1.2

2、5％膽固醇的飼料喂養(yǎng)，中等脂肪飲食組（MF組）4只，給予含10％脂肪的飼料喂養(yǎng)。HF組因飼養(yǎng)不當(dāng)死亡1只。14周后，從HF組中隨機(jī)選擇3只小鼠，將其與4只MF組小鼠全部處死，采集血漿，檢測(cè)血脂含量;取主動(dòng)脈竇，行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色、冰凍HE染色和油紅0染色;取腹主動(dòng)脈，行常規(guī)HE染色。上述動(dòng)脈病理切片光鏡下觀察并判斷造模是否成功，同時(shí)，比較不同脂肪和膽固醇含量飼料喂養(yǎng)后小鼠的Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比、血脂以及動(dòng)脈病理切片

3、的變化。
　　實(shí)驗(yàn)二:將剩余30只20周齡HF組ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為10只藥物對(duì)照組（F組）、10只針灸治療組（A組）、10只模型對(duì)照組（M組），繼續(xù)給予高脂高膽固醇飲食喂養(yǎng)。同時(shí)，將5只喂食普通飼料的C57BL/6J小鼠作為空白對(duì)照組（BC組）。藥物對(duì)照組給予辛伐他汀灌胃治療，40mg/kg.d，針灸治療組給予針刺“內(nèi)關(guān)、后三里（足三里）、三陰交、神門”治療。治療11周后，采集各組小鼠血漿檢測(cè)血脂;檢測(cè)各組小鼠血漿氧化低密

4、度脂蛋白和載脂蛋白B含量;取小鼠主動(dòng)脈竇，行HE染色觀察各組小鼠主動(dòng)脈竇斑塊的形態(tài)變化，行免疫組化染色檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈竇斑塊部位PPARγ、LDLR表達(dá)的差異;取小鼠肝臟，行HE染色觀察各組小鼠肝臟細(xì)胞的形態(tài)變化，行免疫組化染色檢測(cè)各組小鼠肝臟LDLR表達(dá)的差異，行Western blot法檢測(cè)各組小鼠肝臟LDLR蛋白表達(dá)的差異。
　　[結(jié)果]:
　　實(shí)驗(yàn)一:
　　1、MF組和HF組Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比檢測(cè)

5、結(jié)果:MF組的Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比的略高于HF組，但沒有顯著性差異。
　　2、MF組和HF組血脂檢測(cè)結(jié)果:MF組的血脂（總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C）濃度略高于HF組，但沒有顯著性差異。
　　3、MF組和HF組主動(dòng)脈竇切片檢測(cè)結(jié)果:MF組和HF組主動(dòng)脈竇有明顯脂質(zhì)斑塊形成，斑塊中有大量脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞積聚，并出現(xiàn)大塊壞死核和柳葉狀的膽固醇結(jié)晶體，中膜內(nèi)彈力纖維排列比較

6、完整，MF組和HF組均處于纖維斑塊的早期。
　　4、MF組和HF組腹主動(dòng)脈切片檢測(cè)結(jié)果: MF組和HF組腹主動(dòng)脈HE染色切片可見內(nèi)膜無脂質(zhì)斑塊形成，MF組內(nèi)彈力板迂曲形成腹動(dòng)脈瘤
　　實(shí)驗(yàn)二:
　　1、M組、F組、A組、BC組Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比檢測(cè)結(jié)果:A組的Lee's指數(shù)、體脂比與M組相比較小，有顯著差異(P＜0.05，P＜0.05)，A組的肝體比小于與M組。
　　2、M組、F組、A組、BC組血液檢

7、測(cè)結(jié)果:
　　2.1 M組、F組、A組、BC組血脂檢測(cè)結(jié)果:M組、F組、A組TC、TG、LDL濃度高于BC組，均存在顯著性差異(P＜0.05);M組、F組、A組之間各血脂成分濃度相近，不存在顯著性差異。
　　2.2 M組、F組、A組、BC組血漿ApoB、OX-LDL檢測(cè)結(jié)果:A組ApoB、ox-LDL含量明顯低于M組，存在顯著性差異(P＜0.05);BC組的ApoB、ox-LDL含量要顯著低于其他各組。
　　3、M組、

8、F組、A組主動(dòng)脈竇切片檢測(cè)結(jié)果:
　　3.1 M組、F紐、A組主動(dòng)脈竇HE染色結(jié)果:A組主動(dòng)脈竇斑塊面積和斑塊占血管百分比明顯低于M組(P＜0.05)，A組主動(dòng)脈竇斑塊內(nèi)膜單位視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，A組主動(dòng)脈竇斑塊中膜單位視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)高于M組，A組主動(dòng)脈竇血管中膜內(nèi)膠原纖維層最大厚度大于M組(P＜0.05)，這表明針刺能夠減少脂質(zhì)斑塊面積，抑制斑塊內(nèi)膜下細(xì)胞凋亡和壞死，抑制平滑肌細(xì)胞的遷移和膠原纖維的降解，

9、明顯抑制斑塊的發(fā)展。
　　3.2 M組、F組、A組主動(dòng)脈竇PPARγ免疫組化染色結(jié)果:A組主動(dòng)脈竇斑塊中膜單位視野內(nèi)表達(dá)PPARγ蛋白的細(xì)胞數(shù)高于M組(P＜0.05)，表明針刺能夠提高主動(dòng)脈竇斑塊內(nèi)的PPARγ蛋白的表達(dá)，抑制中膜內(nèi)炎癥的進(jìn)展。
　　3.3 M組、F組、A組主動(dòng)脈竇LDLR免疫組化染色結(jié)果:A組主動(dòng)脈竇斑塊內(nèi)膜單位視野內(nèi)表達(dá)LDLR蛋白的細(xì)胞數(shù)與M組無明顯差異，表明針刺治療對(duì)主動(dòng)脈竇斑塊內(nèi)膜下LDLR蛋白的表

10、達(dá)無明顯影響。
　　4、M組、F組、A組、BC組切片肝臟檢測(cè)結(jié)果:
　　4.1 M組、F組、A組、BC組肝臟HE染色結(jié)果:A組肝臟肝腺泡3區(qū)的單位視野肝細(xì)胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，A組肝臟肝腺泡3區(qū)的肝細(xì)胞內(nèi)未出現(xiàn)M組肝細(xì)胞中出現(xiàn)的大顆粒脂滴，表明針刺抑制肝細(xì)胞的凋亡和壞死，針刺減少肝臟細(xì)胞內(nèi)脂滴大小，減少脂肪變性等炎癥狀態(tài)。
　　4.2 M組、F組、A組、BC組肝臟LDLR免疫組化染色結(jié)果:A組肝臟肝腺泡3區(qū)

11、的單位視野內(nèi)表達(dá)LDLR蛋白的肝臟細(xì)胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，表明針刺提高肝細(xì)胞LDLR蛋白表達(dá)。
　　5、M組、F組、A組、BC組肝臟LDLR的蛋白質(zhì)免疫印跡雜交(Western blotting)結(jié)果:針刺后肝臟內(nèi)細(xì)胞LDLR蛋白表達(dá)增高。
　　[結(jié)論]
　　針刺治療能通過調(diào)節(jié)肝臟和血管內(nèi)脂質(zhì)和能量代謝、抗氧化、抗炎癥、抑制血管平滑肌細(xì)胞遷移增殖、抑制血管斑塊破裂、抑制肝臟細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、泡沫細(xì)胞等細(xì)胞的