氣腫疽梭菌抗原提純及分析.pdf

1、本試驗(yàn)旨在了解氣腫疽梭菌的抗原特性，提取經(jīng)過(guò)厭氧培養(yǎng)的氣腫疽梭菌菌體及其分泌的毒素，粗提體抗原為氣腫疽梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（C54-1）經(jīng)過(guò)超聲波裂解后制備而成，粗提分泌抗原由毒素經(jīng)飽和硫酸銨處理制備而成，再分別通過(guò)Sephadex G-200凝膠柱分離純化后，應(yīng)用垂直凝膠電泳（SDS-PAGE）及免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blotting）對(duì)氣腫疽梭菌粗提及純化的菌體抗原和分泌抗原進(jìn)行反應(yīng)原性分析。結(jié)果表明，氣腫疽梭菌的體抗原有八個(gè)明顯的

2、蛋白峰，電泳圖譜上分別出現(xiàn)了與之相對(duì)應(yīng)的條帶，分子質(zhì)量分別為93kD、72kD、56kD、46kD、38kD、26kD、15kD、11kD，其中第二（72kD）、五（38kD）、六（26kD）峰的抗原表現(xiàn)出明顯的特異性。分泌抗原有七個(gè)主要蛋白峰，應(yīng)用垂直凝膠電泳（SDS-PAGE）后，呈現(xiàn)明顯的藍(lán)色條帶的是第二、第三、第五、第七蛋白峰，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量分別為93kD、70kD、48kD和32kD，用免疫印跡技術(shù)分析氣腫疽菌體抗原及分泌蛋白

3、的抗原組分發(fā)現(xiàn)，小鼠感染氣腫疽梭菌的陽(yáng)性血清能與抗原組分蛋白起反應(yīng)，其中菌體抗原72kD、38kD、26kD蛋白帶顯色最深，分泌抗原93kD和48kD呈現(xiàn)出特異性條帶。
　　將純化的特異性菌體及分泌抗原加入佐劑，免疫小白鼠（25g/只），并增設(shè)對(duì)照組，利用瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)原理，對(duì)純化的氣腫疽梭菌特異性蛋白抗原做免疫原性分析。結(jié)果表明，特異性氣腫疽梭菌菌體抗原產(chǎn)生的抗體效價(jià)最高可以達(dá)到1:64，比粗提全菌抗原所產(chǎn)生的效價(jià)高；氣腫疽梭菌特