褪黑素和瘦素影響蛋雞性成熟機制的研究.pdf

1、褪黑素具有廣泛的生理和藥理作用，能影響多個系統(tǒng)（包括免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)），同時也對生物的晝夜節(jié)律、性成熟及生殖、免疫反應(yīng)、代謝、腫瘤、衰老等均有調(diào)節(jié)作用。性成熟是一個復(fù)雜的過程，參與觸發(fā)青春發(fā)育啟動的物質(zhì)或機制目前尚不十分清楚，褪黑素對下丘腦-垂體-性腺軸的作用機制目前未有確切的研究成果。瘦素具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，在能量代謝、脂肪代謝、繁殖等方面具有重要的調(diào)控作用，褪黑素可抑制瘦素的產(chǎn)生，瘦素受體在代謝與生殖內(nèi)分泌之間起重要

2、作用。本文為了探索光照周期和能量調(diào)節(jié)蛋雞生殖軸的效應(yīng)機理，設(shè)計了光照周期、外源褪黑素、飼喂水平和外源瘦素四個影響因子，采用分子生物學(xué)手段，研究對光敏感的神經(jīng)內(nèi)分泌高位調(diào)節(jié)器松果腺與下丘腦-垂體-性腺軸的交互作用，揭示生殖節(jié)律的環(huán)境依賴依據(jù)及光照和能量調(diào)整生殖節(jié)律的機理。
　　光照周期處理組選用10周齡海蘭灰商品蛋雞240只，隨機分為3組，試驗Ⅰ組光照周期為8L∶16D，試驗Ⅱ組光照周期為12L∶12D，試驗Ⅲ組光照周期為16L∶8

3、D，試驗Ⅲ組光照周期為16L∶8D，每組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。褪黑素處理組選用10周齡海蘭灰商品蛋雞320只，隨機分為4組，每組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞，試驗Ⅰ組為8小時光照對照組，試驗Ⅱ組為16小時光照對照組，試驗Ⅲ組基礎(chǔ)日糧中添加低劑量褪黑素(20mg/kg)，試驗Ⅳ組基礎(chǔ)日糧中添加高劑量褪黑素(200mg/kg)。取得的主要結(jié)果如下:(1)體重與跖長、龍骨長、恥骨間距、雞冠長厚高呈顯著正相關(guān);(2)光照試驗中16小時光

4、照處理組與8小時光照處理組相比，育成雞開產(chǎn)日齡提前了21.75天，性成熟體重降低了87.1g。試驗2中，外源褪黑素促使開產(chǎn)日齡推遲，性成熟體重增加，腹脂絕對重和相對重增加;(3)血漿甘油三酯濃度在性成熟時顯著增加，光照周期和外源褪黑素對性成熟過程中蛋雞血漿胰島素和葡萄糖濃度影響差異不顯著;(4)短光照抑制GnRH受體mRNA表達，長光照促進GnRH受體mRNA表達;下丘腦GnRH受體mRNA表達量與年齡呈負相關(guān);(5)在性成熟前FSHR

5、基因mRNA表達呈現(xiàn)出波動性增長趨勢;給予外源褪黑素可降低性成熟前垂體FSHR基因mRNA表達，對性成熟后FSHR基因mRNA表達無顯著影響;(6)不同光照周期或給予外源褪黑素對垂體LHR mRNA表達無顯著影響，結(jié)果提示在卵巢功能的調(diào)節(jié)中，除了下丘腦—垂體—卵巢軸外，還存在著卵巢局部多因子調(diào)節(jié)系統(tǒng)。(7)性成熟前卵巢ERmRNA表達量呈現(xiàn)隨年齡增長而增加的趨勢;(8)垂體MELR1A mRNA基因表達量隨年齡增長呈下降趨勢;不同光照周

6、期對下丘腦、垂體、卵巢MELR1A mRNA基因表達無顯著影響;長光照促進了性成熟時腹脂MELR1A mRNA表達;外源褪黑素促進性成熟垂體MELR1A mRNA表達;外源褪黑素并未達到顯著抑制性成熟腹脂MELR1A mRNA表達的效果。MELR1B mRNA在下丘腦表達量最高，其次為垂體、卵巢和腹脂;性成熟后下丘腦MELR1B mRNA表達呈現(xiàn)下降趨勢，垂體、卵巢和腹脂MELR1B mRNA表達量無顯著變化;(9)下丘腦和垂體LEPR

7、基因表達量隨年齡增加呈遞減趨勢，卵巢LEPR和ER基因表達量隨年齡增大呈增加趨勢;(10)研究推測性成熟過程中褪黑素受體與下丘腦—垂體—卵巢軸的成熟具有相關(guān)性，主要是通過MELR1A抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)啟動，或與LEPR在垂體進行整合，或與其他HPG調(diào)節(jié)的信號相互作用影響繁殖性狀。
　　飼喂水平和光照周期對蛋雞卵巢和腹脂LEPR、MELR1A和MELR1B基因表達影響:選用10周齡海蘭灰育成雞480只，采用2(自由采食，自由采食量80

8、％)*3(8L∶16D，12L∶12D，16L∶8D)雙因子設(shè)計，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。結(jié)果如下:飼喂水平和光照周期對14周齡和18周齡蛋雞腹脂LEPR、MELR1A、MELR1B基因表達不存在互作效應(yīng)，對14周齡、18周齡和性成熟蛋雞卵巢ER、LEPR、MELR1A、MELR1B基因表達不存在互作效應(yīng)，僅對性成熟時蛋雞腹脂LEPR基因表達存在互作效應(yīng);限飼顯著抑制了14周齡、18周齡和性成熟時卵巢ER、LEPR和MELR1B

9、基因表達。14周齡時，長光照處理組腹脂LEPR基因表達量顯著低于短光照處理組，性成熟時短光照周期和限飼抑制了蛋雞腹脂LEPR基因表達;光照周期對卵巢LEPR基因表達影響差異不顯著，飼喂水平對卵巢LEPR基因表達影響非常顯著，表明在蛋雞性成熟啟動過程中，LEP基因影響繁殖調(diào)控主要受飼喂水平和體脂水平的影響。
　　外源瘦素對禁食后蛋雞生殖功能恢復(fù)調(diào)控研究:25只體重相近（1560 g±114 g）的蛋雞隨機分為5組，每組5只雞，Ⅰ組自

10、由攝食組;Ⅱ組禁食對照組;Ⅲ組禁食+低濃度1eptin;Ⅳ組禁食+中濃度1eptin;Ⅴ組禁食+高濃度1eptin。4個禁食組于第1天和第2天禁食，之后恢復(fù)自由攝食。第3天到第5天每天早上08:00-08:30，3個注射組的蛋雞通過跖部靜脈注射用0.75％ PBS-BSA（1mg/mL）稀釋后的商品化重組小鼠1eptin。2個對照組在同樣的時間注射0.75％PBS-BSA（1mg/mL）。3個1eptin處理組的1eptin注射量分別為

11、50(F+L)，200(F+M)和400(F+H)μg/只。主要結(jié)果如下:2天禁食導(dǎo)致了產(chǎn)蛋期蛋雞卵巢功能的受損，適當濃度的外源瘦素可以促進蛋雞受損卵巢的恢復(fù);外源注射中濃度小鼠重組瘦素促進了垂體MELR1A表達，抑制了垂體LEPR基因表達;禁食可以抑制卵巢LEPR基因表達，而瘦素可以促進卵巢LEPR基因的表達，抑制MELR1A和MELRA1B基因表達，研究推測外源瘦素可以通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控卵巢機能的恢復(fù)或直接與其作用來參與調(diào)控蛋雞卵