以細(xì)胞凋亡為佐劑效應(yīng)的新型DNA疫苗載體研究.pdf

1、　　本課題主要從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的視角，提出了具有佐劑效應(yīng)的RNA分子與抗原蛋白共表達(dá)的全新思路，對DNA疫苗載體的優(yōu)化策略進(jìn)行了探索。以SFV為代表的甲病毒復(fù)制子載體是目前DNA疫苗研究的一個熱點。這類載體借助高水平的轉(zhuǎn)錄和免疫激活功能獲得了比傳統(tǒng)的DNA疫苗載體更高的抗原呈遞和免疫激活效率[1]。但是基于SFV復(fù)制子的DNA疫苗的免疫效果受到基因表達(dá)設(shè)計等因素的影響，仍存在很大的優(yōu)化空間。體外研究表明，SFVC蛋白mRNA編碼區(qū)5’-端

2、102bp是一個翻譯增強區(qū)，對其下游編碼序列的翻譯有一定的增強作用[2,3]。但是在基于甲病毒復(fù)制子的DNA疫苗中引入該翻譯增強區(qū)對于疫苗的免疫原性的影響尚未見報道。因此，我們對表達(dá)HIVGag抗原的SFV復(fù)制子DNA疫苗進(jìn)行了改造，在gag基因5’端融合了SFVC蛋白的翻譯增強區(qū)，并對該序列對抗原表達(dá)和疫苗免疫原性的影響進(jìn)行探討。試驗結(jié)果表明，衣殼蛋白5’翻譯增強區(qū)增強了Gag表達(dá)和特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，但對體液免疫應(yīng)答沒有顯著影響

3、。　　我們嘗試選擇一個簡單有效的凋亡刺激信號作為小分子佐劑應(yīng)用于DNA疫苗。國外研究者曾對能夠在體外激活PKR(dsRNA依賴性蛋白激酶)的RNA分子結(jié)構(gòu)作了大量的基礎(chǔ)性研究工作，而PKR是與病毒感染誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和IFN抗病毒效應(yīng)密切相關(guān)的一個重要的媒介分子[5]。因此，我們在現(xiàn)有的疫苗載體pDRVI1.0上引入能夠轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生特殊結(jié)構(gòu)的87nt單鏈RNA的表達(dá)盒，并分析該表達(dá)盒對細(xì)胞凋亡和DNA疫苗免疫效率的影響。試驗結(jié)果表明，本研究