樺褐孔菌菌株遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、本論文以采自不同國家及地區(qū)的21株樺褐孔菌菌株為試驗(yàn)材料，通過比較菌絲的生物學(xué)特性及多糖產(chǎn)量，并進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記分析，探明樺褐孔菌菌株之間的遺傳差異，為樺褐孔菌種質(zhì)資源的科學(xué)保護(hù)與利用提供參考，主要研究結(jié)果如下：
　　1.不同國家或地區(qū)樺褐孔菌菌株菌絲生物學(xué)特性差異較大，同一地區(qū)的菌株菌絲生物學(xué)特性較接近；編號為JL03的樺褐孔菌菌株菌絲體的多糖產(chǎn)量顯著高于其它菌株，高達(dá)7.68 g。
　　2.采用改良 CTAB法成功提

2、取了樺褐孔菌菌絲體 DNA。對影響 ISSR-PCR反應(yīng)體系的主要成分及熱循環(huán)數(shù)進(jìn)行篩選和優(yōu)化，確定了樺褐孔菌ISSR-PCR最適反應(yīng)體系為：模板DNA濃度10 ng，dNTPs濃度100μmol·L-1，引物濃度25 pmol·L-1，Taq DNA聚合酶濃度0.5 U，Mg2+濃度2.3 mmol·L-1，10×buffer2.5μl，其余用ddH2O補(bǔ)足。確定反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min，30個(gè)循環(huán)：94℃變性1 min

3、、45℃~51℃退火1 min(退火溫度因不同引物而定)、72℃延伸1 min，最后72℃延伸5 min，4℃保存。
　　3.本試驗(yàn)應(yīng)用11條ISSR引物對21株不同來源的樺褐孔菌菌株進(jìn)行了指紋圖譜分析，共擴(kuò)增DNA譜帶183條，其中多態(tài)性譜帶169條，多態(tài)率高達(dá)92.3％。聚類分析結(jié)果表明：利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)可將全部供試菌株區(qū)分開，遺傳相似系數(shù)水平在0.605~0.880之間，在相似系數(shù)為0.763時(shí)，21個(gè)樺褐孔菌菌株聚

4、為六大類群，其結(jié)果與地理分布有較強(qiáng)的相關(guān)性。
　　4.采用聚類分析法比較不同國家的樺褐孔菌菌株菌絲生物學(xué)特性及多糖產(chǎn)量，以5個(gè)生物學(xué)特性為影響因子的聚類分析結(jié)果與地理分布有較強(qiáng)的相關(guān)性，體現(xiàn)了生物學(xué)特性與地理相似性的統(tǒng)一；以多糖產(chǎn)量為影響因子的聚類分析結(jié)果卻未見明顯的地理分布差異。
　　綜上所述，21株樺褐孔菌在生物學(xué)特性及DNA水平上均有顯著差異，兩者分析結(jié)果大致相同，且與地理分布有較強(qiáng)相關(guān)性。不同菌株間的多糖產(chǎn)量有顯著差