龍眼遺傳多樣性及親緣關(guān)系的ISSR分析.pdf

1、龍眼起源于我國，是我國南方特產(chǎn)果樹之一，種質(zhì)資源十分豐富。但長期以來，對龍眼資源的分類和利用，都是采用林奈和恩格勒的形態(tài)特征分類法，往往有些種、品種和品系在外貌和彩態(tài)特征上十分相似，但親緣關(guān)系和遺傳特性卻相差巨大，使得龍眼的分類地位及親緣關(guān)系一直存在著較多的爭議，并給龍眼的新品種培育和資源利用帶來困難。本試驗(yàn)以廣西區(qū)域內(nèi)廣泛收集的60個(gè)龍眼品種為試材，應(yīng)用lSSR分子標(biāo)記技術(shù)，探討龍眼的分類和品種之間親緣關(guān)系的研究。試驗(yàn)結(jié)果表明：

2、 1、通過對SDS、CTAB和改良CTAB法三種基因組DNA提取方法的比較，從純度、產(chǎn)率等方面考慮，認(rèn)為改良CTAB法較為適合龍眼基因組DNA的提取。采用該方法提取的龍眼基因組DNA，經(jīng)電泳檢測，主帶清晰，無降解，分光光度計(jì)檢測，A<,200>/A<,280>的值在1.81-1.84之間，符合lSSR反應(yīng)的要求。 2、通過對Tag DNA聚合酶,dNTP,模板DNA,Primer不同濃度的優(yōu)化試驗(yàn)及對PCR反應(yīng)程序的篩選，確定

3、了合適的反應(yīng)體系和反應(yīng)程序，從而建立了龍眼的l SSR分析技術(shù)體系。在20 μl反應(yīng)體系中，模板DNA 75ng，Primer 5 μ moI， rTaq poI ymerase 1 U，dNTP 4 mmoI， Tris-HCl(pH 8.3)200 μmoI。反應(yīng)程序?yàn)椋侯A(yù)變性，94℃5min；變性，94、C1min；退火1 min；延伸，72℃2min；40個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保存。 3、利用篩選得到的12條

4、lSSR引物對全部60個(gè)龍眼品種進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增產(chǎn)生119條總帶，其中共有帶52條，多態(tài)性條帶67條，多態(tài)性比率為56.30％。擴(kuò)增片段長度分布在1OObp-2000bp之間，平均每個(gè)引物能擴(kuò)出1O條帶。 4、運(yùn)用NTSYS軟件，采用Dice相似系數(shù)分析ISSR反應(yīng)結(jié)果，得到了60個(gè)品種間的親緣關(guān)系樹狀圖。以0.80作為相似系數(shù)的分界點(diǎn)，60個(gè)樣品通過基因組ISSR分成2大類：龍荔單獨(dú)為一類，另一類在相似系數(shù)0.85的水平

5、將其余的59個(gè)龍眼材料分為7個(gè)品種群：品種群I：東壁、未知實(shí)生2；品種群Ⅱ：立冬本；品種群Ⅲ：烏龍嶺、九葉烏、佳圓；品種群Ⅳ：靈龍、早白露；品種群V：車站、桂香、香蜜、小廣眼等12個(gè)品種(系)；品種群Ⅵ：大烏圓、大廣眼、儲(chǔ)良、古山二號(hào)、石硤等27個(gè)個(gè)品種(系)；品種群Ⅶ：青山水柜、洪武本、草灰本、處署本、桂明等12個(gè)品種(系)。 5、利用ISSR技術(shù)可以對基因組的所有序列直接分析，不受環(huán)境的影響，在分子水平上利用ISSR技術(shù)對6