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文檔簡介
1、通過建立適合虉草的ISSR-PCR反應(yīng)體系,利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)分別對22份不同產(chǎn)地的虉草種質(zhì)材料和18份雜交虉草種質(zhì)材料的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對其產(chǎn)物的電泳條帶進(jìn)行遺傳多樣性分析。探討不同產(chǎn)地的虉草種質(zhì)材料和雜交虉草種質(zhì)材料遺傳變異性和遺傳多樣性,為虉草遺傳資源的鑒定,優(yōu)良品質(zhì)資源的挖掘、改良,品種選育以及在雜交優(yōu)勢育種上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
1、建立了虉草ISSR-PCR優(yōu)化擴(kuò)增體系。采用單因素試驗
2、,通過不同的dNTP濃度、引物濃度、模板DNA濃度及Taq酶濃度對PCR反應(yīng)體系條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了虉草基因組DNA的ISSR-PCR優(yōu)化擴(kuò)增體系:20μL反應(yīng)體系中,Taq DNA聚合酶0.3μL、10×PCR Buffer2μL、dNTP1.5μL、模板DN A50 ng、引物1.5μL、ddH2013.7μL。
2、從24條ISSR引物中,基于22份不同產(chǎn)地的虉草和18份雜交虉草種質(zhì)材料,分別篩選出10條和12條多態(tài)性高
3、、條帶清晰、分布均勻的ISSR引物。采用這些引物分別對22份不同產(chǎn)地的虉草和18份雜交虉草種質(zhì)材料進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記分析,結(jié)果表明,ISSR分子標(biāo)記可有效地應(yīng)用于虉草的遺傳多樣性評價。
3、運(yùn)用篩選獲得的10條引物,對22份不同產(chǎn)地虉草種質(zhì)材料的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳后檢測,共獲得160條清晰譜帶,其中,多態(tài)性條帶為145條,平均每條引物擴(kuò)增16個位點,多態(tài)位點百分率(P)為90.62%。用POPGE32分析
4、軟件對22份不同產(chǎn)地的虉草種質(zhì)材料進(jìn)行遺傳多樣性統(tǒng)計分析。結(jié)果表明:22份不同產(chǎn)地的虉草種質(zhì)材料總的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.5281,Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.4450,香農(nóng)信息指數(shù)(I)為0.4614,表明了源于不同地區(qū)的22份蕊草種質(zhì)材料具有豐富的遺傳多樣性。運(yùn)用篩選獲得的12條引物,對18份雜交虉草材料的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其產(chǎn)物電泳后檢測,共擴(kuò)增得到176條清晰譜帶,其中多態(tài)性條帶為148條,平均每條引物產(chǎn)生14
5、.7個位點,群體總的多態(tài)位點百分率(P)為84.09%,總的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.5196,Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.2991,香農(nóng)信息指數(shù)(I)為0.3079。
4、基于22個不同地區(qū)虉草種質(zhì)的ISSR-PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖譜,運(yùn)用NTSYS-PC軟件計算,獲得不同地區(qū)虉草種質(zhì)間的遺傳距離,然后運(yùn)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件和離差平方和聚類法進(jìn)行聚類分析,構(gòu)建親緣關(guān)系樹狀圖。當(dāng)取距離系數(shù)GD=0.42時,
6、22份不同產(chǎn)地的虉草種質(zhì)材料可分為四大類群,具體分類情況為:第一大類群是來自甘肅的虉草(A1)和美國的虉草(A2)材料,類內(nèi)種質(zhì)間遺傳相似系數(shù)為0.5875。第二大類群包含A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10和A12九份材料,類內(nèi)種質(zhì)間遺傳相似系數(shù)范圍在0.6171-0.8250間;該類群又可細(xì)分為三個亞類,第一亞類為來自中國江西廬山(A3)和湖北武漢(A4)地區(qū),第二亞類是來自中國新疆富蘊(yùn)(A5)、加拿大(A6)和俄羅斯阿
7、爾漢格爾斯克(A7)等地區(qū),第三亞類是來自俄羅斯的加里寧格勒(A8)、卡累利亞(A9)、新西伯利亞(A10)和薩馬拉(A12)等西北部地區(qū)。第三大類群包含A11、A13、A14和A15、A16和A18六份材料,類內(nèi)種質(zhì)間遺傳相似系數(shù)范圍在0.6271-0.8063間;該類群又可細(xì)分為二個亞類,第一亞類是來自俄羅斯塔波夫(A13)、鄂木斯克(A14)和梁贊(A15)等中西部地區(qū);第二亞類是來自俄羅斯濱海邊疆區(qū)(A11)、庫頁島(A16)和
8、中國江蘇鎮(zhèn)江(A18)等亞洲東部地區(qū)。第四大類群包含A17、A19、A20、A21和A22五份材料,類內(nèi)種質(zhì)間遺傳相似系數(shù)范圍在0.5900-0.7438間;該類群又可細(xì)分為二個亞類,第一亞類是來自美國(A19、A21)和中國哈爾濱(A20)地區(qū),第二亞類是來自中國通遼地區(qū)的野生虉草(A19)和通草1號虉草(A21)。該結(jié)果說明同一地域的虉草種質(zhì)在很大程度上表現(xiàn)出遺傳相似性,不同地域的虉草種質(zhì)材料存在較大遺傳差異,但個別材料也存在遺傳相
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