小鼠耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文小鼠耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系的建立姓名：韓芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科指導(dǎo)教師：褚漢啟崔永華20060401華中利技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文加，并抑制多角形細(xì)胞層的增大。部分多角形細(xì)胞體積變大，呈“泡沫樣”外觀。20天左右，移植塊逐漸變黑進(jìn)而裂解消失。經(jīng)過反復(fù)傳代。細(xì)胞最長生長4周左右。電鏡下見多角形細(xì)胞為一個或二個卵圓形核有豐富的細(xì)胞器并有分泌小泡，可見微絨毛等上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：采用組織塊培

2、養(yǎng)方法，成功建立了小鼠血管紋邊緣細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型，為進(jìn)一步研究內(nèi)淋巴的形成機(jī)制提供了良好的條件。【關(guān)鍵詞】血管紋；邊緣細(xì)胞；小鼠；原代培養(yǎng)第二部分改良小鼠耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定目的：在改良取材方法的基礎(chǔ)上建立更穩(wěn)定、可靠的小鼠耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系，為進(jìn)一步利用邊緣細(xì)胞進(jìn)行生理學(xué)、免疫學(xué)、病理生理學(xué)、生物化學(xué)等方面的研究奠定基礎(chǔ)。方法：用機(jī)械分離和化學(xué)消化結(jié)合的方法制成細(xì)胞懸液，j4其接種于35cm培養(yǎng)皿中貼壁生

3、長，加入含有10％胎牛血清、氫化可的松、表皮生長因子、三碘甲狀腺原氨酸、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等促進(jìn)生長成分的完全培養(yǎng)基，于37。C、5％C02／95％空氣的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每曰觀察細(xì)胞生長狀況，每周換液二次。用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定細(xì)胞的中問絲類型。用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定細(xì)胞膜上的離子通道。結(jié)果：光鏡下，培養(yǎng)24小時至4天培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞貼壁，未見明顯增長。第5天，多角形細(xì)胞開始增多。第7天，在成片的梭形細(xì)胞區(qū)域內(nèi)，多角形細(xì)胞呈單層極性排列