2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:1)探討原癌基因c-Myc在人髓母細胞瘤細胞系UW228-2和UW228-3細胞內以及髓母細胞瘤和瘤周小腦的石蠟包埋組織微陣列中的表達情況;2)觀察白藜蘆醇對髓母細胞瘤細胞系c-Myc表達的影響及其與細胞生長和存活的關系;3)分析c-Myc對細胞生長和細胞周期的作用。通過上述研究,進一步了解:白藜蘆醇抗髓母細胞瘤作用的分子機制和c-Myc與髓母細胞瘤生長、分化和凋亡之間的關系,以期加深對髓母細胞瘤細胞分子生物學特點的認識并為改善臨

2、床髓母細胞瘤的治療現(xiàn)狀提供新的實驗室指標和理論根據(jù)。 方法:人髓母細胞瘤細胞系UW228-2和UW228-3培養(yǎng)于含10﹪進口胎牛血清的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)培養(yǎng)基中,5x104/ml密度的細胞培養(yǎng)于Φ60和Φ100mm的培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)24小時。白藜蘆醇溶解于二甲基亞砜(DMSO,demethylsulfoxide)溶液中,以5mM的濃度儲存,使用前稀釋到100μM。采用Try

3、panBlue計數(shù)法檢測各實驗組中細胞的增殖活性,免疫細胞化學、免疫熒光、RT-PCR和Western-blot等方法系統(tǒng)地分析了各實驗組中c-Myc基因表達水平的改變及其與白藜蘆醇誘導的細胞分化和凋亡的關系。用從臨床收集的11例髓母細胞瘤及非瘤腦組織的石蠟包埋標本制成石蠟組織微陣列,進行c-Myc的免疫組織化學染色。采用流式細胞儀檢測正常培養(yǎng)和經(jīng)白藜蘆醇處理的UW228-2細胞系細胞周期的變化及細胞凋亡情況。用陽離子脂質體轉染法將c-

4、Myc反義寡核苷酸導入UW228-2細胞以封閉基因表達,而后觀察細胞周期的變化、細胞凋亡的情況并與來自白藜蘆醇處理細胞系的相應指標加以對照。 結果:1)組織微陣列的免疫組化結果顯示:在11例人髓母細胞瘤樣本中,有8例(72.7﹪)表達c-Myc,其中4例有明顯的核移位現(xiàn)象;提示,c-Myc基因的表達尤其是核移位在髓母細胞瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用;2)免疫細胞化學、免疫熒光、RT-PCR和Western-blot等方法均揭示,經(jīng)白

5、藜蘆醇處理后的人髓母細胞瘤細胞系(UW228-2和UW228-3)在出現(xiàn)細胞分化和凋亡現(xiàn)象的同時,伴有c-Myc的表達下調;3)流式細胞技術的分析結果表明,經(jīng)白藜蘆醇處理的細胞出現(xiàn)了S期細胞周期阻滯;4)陽離子脂質體介導的c-Myc反義寡核苷酸轉染技術可有效抑制c-Myc基因在靶細胞中的表達并使細胞出現(xiàn)凋亡和S期細胞周期阻滯的現(xiàn)象,但不誘導細胞出現(xiàn)分化樣的形態(tài)學改變。 結論:1)白藜蘆醇通過誘導細胞分化和凋亡發(fā)揮抗髓母細胞瘤的作

6、用;2)本實驗結果首次揭示,c-Myc表達的下調在白藜蘆醇的抗髓母細胞瘤作用中起關鍵作用,其結果可能是使細胞停滯在細胞周期的S期;3)c-Myc是髓母細胞瘤的S期促進因子并為該類細胞的生存所必需;4)白藜蘆醇誘導的髓母細胞瘤細胞分化與c-Myc無直接關系,其機制有待進一步探討。c-Myc基因的過表達是髓母細胞瘤的惡性遺傳學標記物并預示罹癌患者的不良預后。無毒副作用的白藜蘆醇對c-Myc表達的抑制作用提示了它在臨床治療髓母細胞瘤的應用前景

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