重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子聯(lián)合丹參治療兔后肢慢性缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.探討重組人bFGF聯(lián)合丹參治療肢體慢性缺血的可行性，為中西醫(yī)結(jié)合治療肢體慢性缺血性疾病提供理論依據(jù)； 2.通過檢查兔血常規(guī)、肝腎功能、動脈造影和病理觀察，評價(jià)bFGF聯(lián)合丹參治療肢體慢性缺血的安全性、丹參在增強(qiáng)bFGF治療肢體缺血性疾病的作用及降低或消除bFGF副作用的價(jià)值。 材料和方法：選擇40只家兔，通過切除左側(cè)后肢股動脈及結(jié)扎其主要分支的方法制作兔后肢慢性缺血模型。隨機(jī)分為4組(每組10只)，A

2、組：bFGF組(10只)，造模后第10天在患側(cè)肢體股內(nèi)側(cè)肌群注射bFGF10μg，造模術(shù)后觀察30天處死；B組：丹參組(10只)，造模后第10天在患側(cè)肢體股內(nèi)側(cè)肌群注射丹參注射液2ml/kg，造模術(shù)后觀察30天處死；C組：bFGF+丹參組(10只)，造模后第10天在患側(cè)肢體股內(nèi)側(cè)肌群注射bFGF10μg和丹參注射液2ml/kg，造模術(shù)后觀察30天處死；D組：對照組(10只)，造模后第10天在患側(cè)肢體股內(nèi)側(cè)肌群注射等量生理鹽水，造模術(shù)后觀

3、察30天處死。動脈造影觀察新生血管形成、側(cè)枝循環(huán)建立及血管有無異常狹窄或增粗情況；取血檢查血常規(guī)、肝腎功能；后肢脛后動脈血壓測定，評價(jià)血流灌注情況；處死動物取股內(nèi)側(cè)肌肉制作標(biāo)本，作微血管密度檢查和病理觀察。 結(jié)果： 1.大體觀察：實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)各組動物均無死亡，造模術(shù)后患肢均有不同程度缺血表現(xiàn)，如跛行、缺血下肢毛發(fā)稀疏、肢體顏色暗紅、趾甲脫落等。用藥后A、B、C組跛行逐漸緩解，手術(shù)創(chuàng)口愈合良好，B組可見皮膚局部有小潰瘍；D組

4、動物缺血癥狀持續(xù)存在，跛行逐漸加重，其中1只出現(xiàn)足趾潰瘍壞疽(10.0％)。 2.下肢血壓測定：造模術(shù)后第10天，各組缺血肢體血壓信號難以測到，考慮此時(shí)缺血肢體血壓為0；造模術(shù)后第30天，A、B、C、D各組小腿血壓左/右比值分別為0.64±0.028、0.50±0.031、0.80±0.022、0.28±0.032， A、B、C組較D組均有顯著性差異(P<0.05)，C組左/右小腿血壓比值最高。 3.下肢動脈造影：A、C

5、組患側(cè)肢體有豐富的側(cè)支血管形成，迂曲走行，分布如網(wǎng)狀，患側(cè)髂內(nèi)動脈、股深動脈代償增粗，遠(yuǎn)端動脈血管通過側(cè)支循環(huán)顯影，充盈速度與健側(cè)接近，A組1只動物(10.0％)造影可見右側(cè)股動脈節(jié)段性管腔狹窄；B組患側(cè)肢體有較多的側(cè)支血管形成，遠(yuǎn)端動脈血管通過側(cè)支循環(huán)顯影，充盈速度慢于健側(cè)；D 組股動脈主干及其分支血管未顯影，新生血管不明顯，有少量纖細(xì)的側(cè)枝血管分布于大腿中段乏血管區(qū)，遠(yuǎn)端動脈未見顯影。 4.微血管密度和微血管/肌纖維束比值：

6、A、B、c組微血管密度和微血管/肌纖維束比值較D組明顯增多，均有顯著性差異(P<0.01)，C組的微血管密度和微血管/肌纖維束比值最高。 5.病理觀察：C組光鏡下HE染色顯示內(nèi)皮細(xì)胞增生活躍，血管生成明顯增多，骨骼肌纖維間新生血管交錯排列，部分相互連接形成環(huán)狀；A、B組光鏡下HE染色顯示內(nèi)皮細(xì)胞增生較多，血管生成增多，可見毛細(xì)血管較多，新生血管形態(tài)較成熟；A、B、C組均未見平滑肌細(xì)胞異常增生，未見畸形血管團(tuán)和腫瘤樣血管等異常血管

7、生長，骨骼肌細(xì)胞未見異常增殖、分化或腫瘤樣生長等表現(xiàn)；D組動物患側(cè)肢體呈缺血性改變，光鏡下 HE 染色顯示骨骼肌纖維間微血管數(shù)量減少，無血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，骨骼肌纖維萎縮、變性，肌纖維直徑減小、間距增大，間質(zhì)代償性增生，且其內(nèi)血管明顯減少，血管新生不明顯。 6.血常規(guī)：造模術(shù)前1天、造模術(shù)后第10天、20天、30天分別從兔耳緣靜脈取血檢測紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板及白細(xì)胞計(jì)數(shù)。各組動物的血常規(guī)各參數(shù)在觀察期間一直保持穩(wěn)定，三組間比較

8、無顯著性差異(P>0.05)。 7.肝腎功能：造模術(shù)前1天、造模術(shù)后第10天、20天、30天分別從兔耳緣靜脈取血檢測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素氮，觀察肝、腎功能的改變。各組肝腎功能各項(xiàng)指標(biāo)在觀察期間均在正常值范圍內(nèi)，各組間比較無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.短期內(nèi)經(jīng)肌肉多點(diǎn)注射bFGF和丹參聯(lián)合應(yīng)用可有效促進(jìn)缺血肢體血管新生、側(cè)支血管建立，為有效治療肢體缺血性疾病，特別是糖尿病下肢缺血性疾病提供理論依據(jù)